Recherche sur les antiviraux anti-vih : - synthese d'immunogenes du 3tc, de l'azt et des metabolites phosphoryles de l'azt. - applications aux dosages enzymo-immunologiques du 3tc, de l'azt et de l'azttp

• Auteur / Autrice : FATIMA AKEB
• Direction : Roger Guedj
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Nice

Résumé

Ce travail vise a developper des dosages enzymo-immunologiques du 3tc, de l'azt et de ses metabolites phosphoryles. Dans cette optique, nous avons prepare les haptenes et les immunogenes du 3tc, de l'azt, de l'aztmp, de l'aztdp et de l'azttp en vue de l'obtention d'anticorps necessaires au developpement de ces dosages. Nous avons mis au point le premier dosage enzymo-immunologique du 3tc avec une limite de detection de 50 pg/ml, une bonne precision avec un coefficient de variation de 10% dans la gamme de concentration 156-5000 pg/ml et enfin une specificite interessante puisque les derives les plus proches structurellement croisent avec des taux inferieurs a 1. 5%. Ce dosage a ete valide ex vivo avec succes pour la determination des taux plasmatiques de 3tc de douze echantillons provenant de patients traites au 3tc dans le cadre de polytherapie. Les anticorps anti-3tc ont ete utilises dans un dosage r. I. A. , qui couple a une technique de separation des metabolites phosphoryles, a permis le dosage intracellulaire indirect du 3tctp (metabolite actif du 3tc) chez six patients traites par une bitherapie (azt + 3tc). Cette technique presente une limite de detection de 0. 2 pmol/10 6 cellules et necessite un volume sanguin de 4 ml. L'immunisation a l'aide du klh-5-o-hs-azt et l'utilisation du traceur ache-5-o-3tc a permis la mise au point d'un dosage e. I. A. De l'azt avec une sensibilite de l'ordre du ng/ml. En vue de l'obtention d'anticorps specifiques de l'aztmp, nous avons prepare l'immunogene necessaire selon deux approches differentes. En ce qui concerne les formes di- et triphosphorylees de l'azt, nous avons choisi dans un premier temps des haptenes ou la liaison p-o-p de ces composes est remplacee par des enchainements p-nh-p et p-ch 2-p. Dans un second temps, nous avons travaille directement sur l'azttp. Les tests de criblage d'anticorps effectues sur les antiserums obtenus par immunisation a l'aide du conjugue klh-azttp montrent clairement la presence d'anticorps anti-azttp mais presentent des taux de reactions croisees importants avec l'azt, l'aztmp et l'aztdp. Seul l'un d'entre eux montre un pourcentage de reactions croisees acceptable (1. 6-6%) et a permis la mise au point du premier dosage direct de l'azttp avec une sensibilite de 0. 15 pmol/ml.