Analyse biochimique et moléculaire d'une zinc-aminopeptidase du Plasmodium falciparum, agent du paludisme

• Auteur / Autrice : Zakia Derhy
• Direction : Joseph Schrevel
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris, Muséum national d'histoire naturelle
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Sciences de la nature et de l'Homme - Évolution et écologie (Paris ; 1995-....)
• Jury : Président / Présidente : Joseph Schrevel
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Isabelle Florent, Ginette Jaureguiberry, Roger Labia
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : André Mazabraud, Roger Mayer

Mots clés

Mots clés contrôlés

Lutte contre

Paludisme

Analyse

Génétique moléculaire

Plasmodium falciparum

Résumé

L'identification de nouvelles potentielles, impliquées dans des étapes clés du cycle biologique de P. Falciparum est devenue essentielle pour concevoir de nouvelles molécules inhibitrices du développement du parasite. Un gène en copie unique a été identifie par immunocriblage d'une banque génomique d'expression de la souche FcB1 de P. Falciparum. Sa séquence présente une phase ouverte de lecture unique et sans intron de 3171 pb, elle possède les caractéristiques (richesse en A+T et usages des codons) de P. Falciparum. Ce gène est exprimé dans les stades érythrocytaires (ARN de 4 kb). Il code pour une protéine de 122 kDa, présentant des similitudes importantes avec les aminopeptidases n d'escherichia coli et haemophilius influenza et significatives avec plusieurs autres aminopeptidases procaryotes et eucaryotes. Elle contient la séquence canonique HExxHx18, caractéristique des zinc-metallopeptidases de la famille m1, et le motif gamen, caractéristique des aminopeptidases de cette famille. La proteine correspondant au produit du gene a été identifiée dans des extraits solubles des stades schizontes erythrocytaires de p. Falciparum, la leucyl-aminopeptidase. Elle correspond à une protéine de 120 kDa et une forme probablement maturée de 68 kDa. In vitro, des formes de maturation supplémentaire de 105 kda et 96 kda sont également mises en évidence. Toutes ces formes sont reconnues par l'anticorps ayant servi à immunocribler la banque ainsi qu'un anticorps dirige contre une séquence peptidique déduite de la séquence du gène. La leucyl-aminopeptidase possède un large spectre d'hydrolyse, clivant les substrats L-Leu> Arg-> Ala-AMC, avec un pH optimal d'activité neutre. Son profil d'inhibition avec différents inhibiteurs de protéases la caractérise comme metallo-aminopeptidase du type N, ce qui est en accord avec les prédictions réalisées à partir de l'analyse de la séquence du gène