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Thèse soutenue

Répartition de bases radio-induites de l'ADN par des glycosylases : spécificités de substrat et mécanismes

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Auteur / Autrice : Cédric D’ham
Direction : Jean Cadet
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Chimie
Date : Soutenance en 1998
Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Résumé

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L'adn cellulaire est soumis de facon constante a des agressions. Face a cela, la cellule possede plusieurs systemes de defense, dont la reparation par excision de base. Les glycosylases sont les enzymes clefs de ce processus. Le present manuscrit concerne l'etude des specificites de substrat et des mecanismes de coupure de trois de ces enzymes : endonuclease iii et fpg d'escherichia coli, ainsi que ogg1 de saccharomyces cerevisiae. Le manuscrit est divise en quatre parties : l'etude de l'excision par l'endonuclease iii de la 5,6-dihydrothymine et de la 5-hydroxy-5,6-dihydrothymine a ete effectuee a partir d'adn soumis a des rayonnements ionisants. L'analyse, par chromatographie gazeuse couplee a un spectrometre de masse, a ete amelioree par une etape de prepurification en chromatographie liquide. Ce systeme permet ainsi d'analyser l'excision de la 5-hydroxy-5,6-dihydrothymine en evitant la contribution des isomeres cis et trans de la 6-hydroxy-5,6-dihydrothymine. Des oligonucleotides modifies contenant un glycol de thymine, une 5,6-dihydrothymine et une 5-hydroxycytosine ont ete synthetises pour determiner les specificites de substrat de l'endonuclease iii et de la fpg. Les ordres de preference des enzymes pour ces produits ont ete etablis a partir des constantes de michaelis. De plus, le mecanisme d'action de l'endonuclease iii a ete reconsidere a partir de resultats obtenus par spectrometrie de masse maldi. Il apparait que ce mecanisme est majoritairement de type hydrolytique. A partir d'un oligonucleotide modifie, la 8-oxo-7,8-dihydroadenine a ete detectee comme etant un produit d'excision de l'enzyme yogg1. L'influence de la base complementaire a la lesion s'est revelee preponderante dans la reconnaissance et l'excision du dommage. La synthese et la caracterisation des quatre isomeres des 5(6)-hydroperoxydes de thymine qui sont des substrats potentiels de l'endonuclease iii ou de la fpg, sont finalement rapportees dans un dernier chapitre.