Recherche Avancée

Thèse soutenue

Protéolyse matricielle : étude de la gélatinase-b de 92 KDA et de son inhibiteur specifique le TIMP-1 : application à la polyarthrite rhumatoïde

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Auteur / Autrice : Philippe Gaudin
Direction : Françoise Morel
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences de la Vie et de la Santé
Date : Soutenance en 1998
Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble, Isère, France ; 1971-2015)

Résumé

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La synovite rhumatoïde représente un modèle de processus inflammatoire chronique ou le remodelage pathologique de la matrice extracellulaire est responsable de lésions anatomiques. Il dépend principalement des métalloprotéases matricielles, de certaines protéases à sérine comme les activateurs du plasminogène ou l'élastase des polynucléaires neutrophiles. Ces protéases concourent à une protéolyse focalisée qui dépend de la compartimentation des enzymes protéolytiques, de l'action d'inhibiteurs, spécifiques ou non, de la liaison enzyme-substrat, de l'éventuelle localisation membranaire des enzymes. Les polynucléaires neutrophiles sont présents en grand nombre dans le liquide synovial rhumatoïde. Les lymphocytes T et B, localisés dans la membrane synoviale, participent à la réaction inflammatoire et immune. Nous avons montre que l'élastase des polynucléaires neutrophiles préalablement actives par le PMA se localise en partie a la membrane plasmique et est capable d'activer la gélatinase-B de 92 KDA (MMP-9) dans l'environnement péricellulaire immédiat. D'autre part, nous nous sommes intéressés à la caractérisation des lymphocytes B en métalloprotéases et en inhibiteurs spécifiques tissulaires (TIMP). Nous avons isolé, purifié le TIMP-1 à partir de milieux de culture de lymphocytes B immortalisés par le virus d'Epstein-Barr par quatre étapes de chromatographie. Il a été identifié par spectrométrie de masse, caracterisé sur le plan de son pouvoir inhibiteur sur la gélatinase-B de 92 KDA préalablement activée par l'APMA. Les mécanismes de régulation de son expression ainsi que de celle de la MMP-9 ont été abordés par l'étude de l'influence de certaines cytokines, facteurs de croissance et ligands comme le PMA, le LPS et la concanavaline A, du calcium libre intracellulaire. La sécrétion de TIMP-1 par rapport à celle de MMP-9 dans les milieux de culture est 1000 fois plus importante sans que l'explication en soit claire. Elle est induite par l'IL-10, le TGFf, le LPS, le PMA. Les résultats suggèrent que l'expression de TIMP-1 et celle de la MMP-9, sont étroitement contrôlées. La chélation du calcium libre intracellulaire entraîne une baisse de la synthèse mais également de l'excrétion du TIMP-1. Nous avons dans une dernière partie étudié les taux synoviaux des gélatinases A ou MMP-2 et B ou MMP-9, du TIMP-1 et de la stromélysine-1 (MMP-3) dans 50 prélèvements. L'activité MMP-9, les taux de MMP-3 et de TIMP-1 permettent de caractériser et d'opposer les liquides mécaniques et inflammatoires.