Caractérisation de nouveaux gènes d'endotoxines de bacillus thuringiensis berliner

Characterisation of new endotoxin genes from bacillus thuringiensis berliner

• Auteur / Autrice : Victor manuel Juarez Perez
• Direction : François Leclant
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Montpellier, ENSA

Résumé

Bacillus thuringiensis (bt) est une bactérie entomopathogene largement utilisée dans la lutte contre les insectes nuisibles. Elle produit des toxines, principalement insecticides, appelées cry. Ces protéines sont assemblées sous la forme d'un corps parasporal et ont une action toxique hautement spécifique. Malheureusement, l'utilisation irrationnelle de ces toxines a mené à l'apparition d'insectes résistants. La recherche de nouvelles toxines cry permettrait donc la mise en place de programmes de gestion de la résistance et par conséquent, de limiter l'apparition de nouveaux cas de résistance. En outre, ces nouvelles toxines permettraient d'élargir le spectre d'action des produits utilises et d'atteindre ainsi d'autres ravageurs. La première partie de ce travail a été consacrée a la mise au point d'une stratégie de recherche de nouveaux gènes cry par pcr. Cette technique, appelée pcr d'exclusion, se déroule en deux étapes: la première permet l'identification des gènes cry connus présents dans un isolat de bt. La seconde étape permet la détection de nouveaux gènes cry et donc, potentiellement de nouvelles toxines. Le criblage d’une collection de souches nous a permis d'identifier une nouvelle séquence cry1 très proche des gènes cry1b, probablement l'holotype d'un nouveau sous-groupe des gènes cry1b. La seconde partie de ce travail a permis la caractérisation de la souche type du serotype h32 de bt, la souche 273 b. Le corps parasporal de cette souche est de forme cubique et est compose de deux protéines de 35 kda et 53 kda. La séquence n-terminale de chacune de ces protéines ne présente pas d'homologie avec les séquences n-terminales des autres protéines cry connues. Cette souche possède une activité nematicide significative. L’analyse des gènes codant pour ces protéines a montré qu'ils sont organisés en opéron et ne présentent pas d'homologie avec les autres gènes cry. La région promotrice ne correspond pas aux séquences consensus déjà connues. Les analyses préliminaires indiquent que ce promoteur serait indépendant de la sporulation. Un mécanisme de cristallisation potentiellement nouveau a également été mis en évidence. Les analyses préliminaires de toxicité avec des souches recombinantes produisant les protéines de 35 kda et 53 kda n'ont pas permis de préciser leur rôle dans l'activité nematicide présentée par la souche 273 b