Etude de la 3-hydroxysteroide deshydrogenase

• Auteur / Autrice : HEE JEONG KIM SIN
• Direction : Jean-François Biellmann
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Dans l'introduction, l'ensemble des travaux anterieurs ayant trait a la 3-hydroxy steroide deshygrogenase (hsd) est resume. Cet enzyme est proche de l'aldose reductase (ar) et d'apres l'homologie de sequence, il doit presenter la meme structure. Son role dans le metabolisme des steroides, notamment des androgenes, justifie tout a fait cette etude. La purification a partir du foie de rat, les criteres de purete et la cristallisation de la hsd sont presentes avec detail et discutes. Comme l'ar, la hsd fixe le cofacteur fortement et presente une activite de transhydrogenase. Cette activite a pu etre demontree sans qu'une etude cinetique puisse etre faite. En effet, on n'a pas trouve de substrat chromophorique qui permette de faire cette etude. L'inhibition de la hsd par des agents anti-inflammatoires et d'autres inhibiteurs a ete etudiee, notamment les inhibiteurs de l'ar qui se sont montres d'assez bon inhibiteurs de la hsd. Cette etude pourrait constituer un point de depart pour la conception d'inhibiteurs de la hsd. L'etude de spectrometrie de masse par electrospray (ms) montre que la hsd avait bien la masse moleculaire deduite de la sequence. La hsd forme des complexes binaires avec les cofacteurs. En effet, la hsd utilise le nad#+ et le nadp#+ comme cofacteur et par ms, on demontre que la hsd a une preference pour le nadp#+. La nature des interactions des inhibiteurs avec des enzymes n'est pas toujours precisee par les methodes cinetiques. Mais la spectrometrie de masse permet de repondre a certaines questions. Ainsi, l'interaction de la hsd avec les inhibiteurs se fait-elle sur l'apoenzyme et/ou l'holoenzyme ? ainsi parmi les inhibiteurs signales dans la litterature, l'indomethacine et la betamethasone se fixent aussi bien sur l'apoenzyme que sur l'holoenzyme. L'indomethacine a une plus forte affinite pour les deux formes de la hsd que la betamethasone. En tout cas les deux inhibiteurs se fixent sur les deux formes. Les essais de cristallisation de cet enzyme ont donne lieu a des cristaux qui auraient pu etre utilises pour une determination de structure. Toutefois la structure de la hsd sous forme d'holoenzyme vient d'etre publiee.