Etude des propriétés antifongiques du 7-aminocholestérol et caractérisation du gène de résistance RTA1 chez la levure Saccharomyces cerevisiae

Fungicide properties of 7-aminocholesterol and characterization of the rta1 resistance gene in the yeast saccharomyces cerevisiae

• Auteur / Autrice : Isabelle Soustre
• Direction : Francis Karst
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biomembranes
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Poitiers

Mots clés

Mots clés contrôlés

Stérols

Résumé

Dans le but de determiner les mecanismes de controle de la proliferation cellulaire par l'ergosterol chez la levure saccharomyces cerevisiae, nous avons etudie l'impact de derives du cholesterol sur la physiologie des cellules de levures. Nous avons ainsi montre que, parmi ces derives, le 7-aminocholesterol est non seulement un puissant inhibiteur de la croissance de s. Cerevisiae, mais qu'il est fongicide a 5 m. Pour determiner la mode d'action de cet inhibiteur de croissance, nous avons isole des souches de levure resistantes a ce produit. Le 7-aminocholesterol agit comme les morpholines sur les souches etudiees, puisqu'il inhibe deux enzymes de la voie de biosynthese des sterols, la 8,7-sterol isomerase et la 14-sterol reductase. Cependant, nos resultats indiquent que son mode d'action differe de celui des morpholines. Aussi avons-nous recherche quelles autres cibles sont touchees par ce nouvel inhibiteur de la biosynthese des sterols. Dans ce cadre, nous avons isole et caracterise un gene de resistance, rta1, a cet inhibiteur, par amplification genique. L'inactivation de ce gene n'est pas letale, mais conduit a une plus grande sensibilite des souches au 7-aminocholesterol. Nous avons montre que cette proteine, possedant 7 domaines transmembranaires putatifs, est membranaire, et fait partie d'une famille comprenant trois autres proteines, a localisation vraisemblablement membranaire, dont la fonction n'est pas encore connue. In vitro, le 7-aminocholesterol a bien un impact sur la membrane plasmique puisqu'il inhibe d'une part l'activite de l'atpase pompe a proton de vesicules isolees de cette membrane et, d'autre part, l'excretion de protons dans le milieu. Cette analyse in vitro a montre que sous l'effet du 7-aminocholesterol l'activite atpasique des souches resistantes est plus forte que celle des souches temoins, elle-meme plus forte que celle des souches inactivees pour le gene rta1. Il existe donc une correlation entre la sensibilite de l'atpase pompe a proton de la membrane plasmique vis a vis du 7-aminocholesterol et la presence de la proteine rta1p