Deracemisation des acides propioniques -aryl substitues par les anticorps catalytiques. Methodologie de dosage de l'exces enantiomerique par anticorps enantioselectifs

Deracemization of -aryl substituted propionic acids using catalytic antibodies. Methodology for measurement of an enantiomeric excess using enantioselective antibodies

• Auteur / Autrice : SAMUEL DOUGAPARSAD
• Direction : André Lubineau
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

La deracemisation represente l'ensemble des processus qui permettent de transformer integralement un racemate en un produit enantiomeriquement pur. Nous avons cherche a deracemiser le (rs)-ketoprofene, un anti-inflammatoire derive des acides propioniques -aryl substitues, au moyen d'anticorps catalytiques (abzymes). Notre strategie a implique en partie la preparation d'un anticorps a activite de racemase. Pour cela, nous avons synthetise un antigene charge (sous forme d'ammonium quaternaire) pour induire une charge negative, judicieusement positionnee dans le site actif de l'anticorps, et pouvant etre responsable d'une catalyse basique. A l'issue d'un protocole d'immunisation suivi d'une fusion cellulaire, des anticorps ont ete selectionnes pour leur reconnaissance de l'antigene dependante du ph. Neanmoins, aucune activite de transfert de proton n'a pu etre observee avec les substrats utilises (analogues cetoniques, esters et thioesters de ketoprofene). Ces memes anticorps, dans certains cas, peuvent stabiliser des intermediaires carbocationiques intervenant dans l'hydrolyse d'acetal ou d'epoxyde. Toutefois, malgre une bonne reconnaissance pour ces substrats, aucune acceleration de l'hydrolyse n'a ete observee, dans nos conditions experimentales. Parallelement, nous avons developpe une methode de dosage de l'exces enantiomerique d'un melange d'ester (r+s)-ketoprofene par anticorps monoclonaux enantioselectifs. Cette methode a implique la preparation d'un haptene racemique puis la production et la purification d'anticorps retenus pour leur reconnaissance enantioselective. Certains anticorps, ayant une affinite vingt fois plus elevee pour le (r)-ketoprofene methyl ester, nous ont permis d'etablir une courbe de calibration. Les resultats montrent que ce dosage possede une sensibilite de detection du substrat avoisinant la nanomole.