Analyse moleculaire du controle de l'activation de nf-(kappa)b et de la transcription du virus de l'immunodeficience humaine 1 (vih-1) par l'inhibiteur i (kappa)b (alpha)

Molecular analysis of the control of nf-(kappa)b activation and the human immunodeficiency virus (hiv-1) transcription by the inhibitor i(kappa)b(alpha)

• Auteur / Autrice : MANUEL SALVADOR RODRIGUEZ MEDINA
• Direction : Jean-Louis Virelizier
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Nos travaux ont porte sur l'etude de la proteine ib-, dont la degradation au cours de l'activation cellulaire conditionne l'activation du facteur de transcription nf-b bona fide, heterodimere compose des sous-unites p50/p65. Ce dernier est essentiel a l'induction transcriptionnelle du genome du vih, mais aussi de nombreux genes cellulaires, dont le gene ib- lui-meme. Nous avons analyse les evenements moleculaires qui controlent la degradation d'ib- et mis en evidence le role critique dans ce phenomene de la sequence c-terminale, qui contient une region sensible a l'attaque proteolitique et une region acide qui possede un domaine pest. Il apparait que les deux regions n- et c-terminales de la molecule sont necessaires a la degradation inductible d'ib-. L'utilisation du peptide aldehyde h-lll-z, bloquant specifiquement les activites proteasiques du proteasome 26s, les techniques de mutagenese dirigee, de separation des compartiments cellulaires, d'immunodetection, et les methodes d'expression transitoires ou stables de vecteurs appropries, nous ont permis d'analyser le role du phenomene d'ubiquitinylation dans la degradation de la proteine ib-, et celui de sequences de localisation nucleaire (sln) ou d'exportation a partir du noyau (sen), dans le trafic de cette molecule dans les cellules normales ou activees. Nous avons pu ainsi mettre en evidence le phenomene insoupconne de translocation nucleaire d'ib- neotranscrit, et decrit deux consequences fonctionnelles de cette translocation. D'une part, la proteine ib- nucleaire s'associe avec nf-b lies a l'adn dans le noyau, et assure la terminaison de la fonction activatrice de nf-b et son transport retrograde vers le cytoplasme. D'autre part, nous avons montre que la sequence sen d'ib, entre en competition avec celle de hiv-rev pour des voies d'exportation nucleaire, bloque la fonction essentielle de rev sur le transport des arn viraux, supprimant ainsi la replication des vih de facon independante de nf-b.