Etude de la secretion de proteines d'interet therapeutique a partir de cellules genetiquement modifiees implantees in vivo

Delivery of proteins of therapeutic interest from genetically modified cells implanted in vivo

• Auteur / Autrice : DELPHINE BOHL
• Direction : Jean-Michel Heard
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

L'introduction stable de materiel genetique dans les cellules somatiques d'un organisme malade est aujourd'hui envisagee pour le traitement de maladies genetiques hereditaires ou acquises. Dans ce but differents vecteurs et differentes strategies de transfert de genes ont ete developpes depuis 1990 de nombreux essais therapeutiques mis en place chez l'homme dans plusieurs indications de maladies ont montre que de nombreux problemes restent poses avant d'envisager de reels benefices curatifs pour les malades. Ces problemes sont principalement lies i) au developpement de vecteurs capables de transferer de maniere stable et efficace les genes d'interet, et ii) a la definition et la validation d'une strategie de transfert de genes dans un modele animal de maladie. Afin d'ameliorer les vecteurs de transfert de genes une meilleure connaissance de la regulation de l'expression des genes transferes in vivo et le developpement de vecteurs dans lesquels l'expression du transgene peut etre controlee, sont des points tres importants. Dans nos travaux, nous avons etudie la regulation de l'expression de genes places sous le controle de differents promoteurs constitutifs, tissu-specifiques et inductibles, introduits dans des vecteurs retroviraux. D'une part nous avons suivi le maintien de l'expression d'un promoteur viral dans des fibroblastes cutanes implantes in vivo. D'autre part nous avons construit des vecteurs retroviraux permettant de reguler, de facon tetracycline-dependante, la secretion de l'erythropoietine murine, a partir de cellules myogeniques in vivo. Une strategie originale de transfert de genes a ete developpee dans le laboratoire afin d'obtenir la secretion systemique de proteines a partir d'implants de fibroblastes genetiquement modifies. Afin de valider cette approche dans un animal, nous nous sommes interesses aux maladies de surcharge lysosomale car les enzymes lysosomales peuvent etre secretees puis captees a distance par les cellules deficientes. Nous avons utilise un modele murin deficitaire en beta-glucuronidase presentant une mucopolysaccharidose, et nous avons implante chez ces animaux des fibroblastes transduits avec un vecteur retroviral exprimant l'enzyme lysosomale. Nous avaons analyse la stabilite et l'efficacite therapeutique du transfert de gene chez ces animaux.