Clonage, etude fonctionnelle et etude de l'expression au cours du developpement des nucleoside diphosphate kinases de xenopus laevis

Functional cloning and developmental expression pattern determination of three nucleoside diphosphate kinases from xenopus laevis

• Auteur / Autrice : TAOUFIK OUATAS
• Direction : ANDRE MAZABKAUD
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Recemment, il est apparu que les nucleoside diphosphate kinases (ndpk), fournissant les nucleoside triphosphates (ntp), sont impliquees dans le developpement et la cancerogenese. L'enzyme est soit surexprimee soit sous exprimee dans les tumeurs, et ceci est souvent en relation avec le caractere metastasiant du cancer. De plus, une des isozymes humaines joue un role activateur dans la transcription du gene c-myc humain. Enfin, les etudes faites chez la souris, la drosophile et dictyostelium suggerent que les ndpk jouent un role dans la transduction des signaux et la differenciation cellulaire. Nous avons clone et sequence plusieurs cdna de ndpk de x. Laevis. Ils correspondent a au moins trois genes, consequence de la pseudotetraploide de x. Laevis, specifiant 3 monomeres homologues, 82 a 87% identiques aux 2 homologues humains. Cette conservation des ndpk a travers l'evolution nous a permis de sauver des mutants de drosophile awd#b#3, nuls pour la ndpk. Cependant, les femelles sauvees restent steriles, l'oocyte ne se differenciant pas en general de ses cellules surs. Avec des anticorps polyclonaux prepares contre deux ndpk recombinantes de x. Laevis et des sondes rna antisens specifiques de chaque cdna, nous avons realise la premiere etude de l'expression specifique des ndpk pendant l'oogenese et au cours de l'embryogenese de x. Laevis. La detection des mrna et des proteines montre que l'expression de la ndpk est regulee transitoirement au cours du developpement precoce. Celle-ci debute a la transition blastuleenne, contrairement a la situation decrite chez la souris et la drosophile. La proteine est abondante dans le cytoplasme des cellules en proliferation mais aussi dans le noyau et les membranes des cellules mesodermiques pendant la gastrulation. L'expression de la ndpk x2 dans les embryons de stade neurula agee s'est revelee etre un marqueur precoce de la rotation somitique. D'autre part, nous avons montre que, comme l'enzyme humaine, une isoforme de ndpk de xenopus laevis (ndpk x1 mais non ndpk x3) etait capable de s'associer au site hypersensible aux nucleases (nhe) contenant le motif cccaccc, dans le promoteur du gene c-myc humain. Curieusement, nous retrouvons ce motif dans les regions 3' non codantes des mrna de ndpk de xenope. L'analyse de ces derniers montre qu'ils ont des particularites de clivage et de polyadenylation suggerant un role de la ndpk dans la maturation de ses propres messagers. Les essais que nous avons realise montrent un effet stabilisateur de la ndpk x1 sur son propre mrna dans des extraits s100 d'oocytes de xenope de stade vi.