Etude du recepteur des complexes facteur intrinseque-cobalamine exprime par les cellules vitellines de rat et de l'effet teratogene des anticorps specifiques de ce recepteur

Study of the receptor for intrinsic factor-cobalamin complexes expressed by rat yolk sac epithelial cells and teratogenic effect of specific antibodies

• Auteur / Autrice : EBRAHIM AYANI
• Direction : Charles Roux
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Bien que les travaux princeps etablissant l'effet pathogene des anticorps anti-rein datent de plus de 30 ans, ladefinition au niveau cellulaire de leur mode d'action reste en grande partie inconnu. Par analogie avec les autressystemes de teratogenese experimentale, il est generalement admis que la dimunition de 10 a 30% de l'accumulation de #1#4csucrose dans les cultures de sac vitellin exposees a de tels anticorps est en relation avec les malformations observees. En depit de tres nombreuses etudes concernant le mode d'action des anticorps, i) les mecanismes cellulaires par lesquels les anticorps diminuent l'internalisation des traceurs d'endocytose phase fluide n'ont jamais ete definis ; ii) la proteine cible, gp280, n'a identifiee que recemment. Les travaux rapportes dans le premier chapitre de cette these avaient donc pour objectif i) d'analyser l'effet d'anticorps teratogenes specifiques d'une proteine definie, gp280, sur l'internalisation du traceur de reference que constitue le #1#4csucrose et ii) d'etudier l'effet des anticorps sur les compartiments intracellulaires. Apres avoir caracterise l'effet teratogene des anticorps dans un systeme de culture embryonnaire in vitro, nous montrons que l'effet quantitatif des anticorps sur l'endocytose phase fluide est faible mais qu'il existe des anomalies des compartiments endocytiques suggerant que l'effet quantitatif pourrait eventuellement n'etre que secondaire a une desorganisation du systeme vesiculaire. Les anticorps specifiques de gp330/megaline ont un effet moins marque mais indiscutable sur l'endocytose, mais n'ont pas d'effet teratogene. Dans un second chapitre, afin de tenter de comprendre la genese des anomalies que nous avions observees, nous avons voulu repondre a deux questions : i) gp280 et gp330 sont-elles internalisees ? ii) si la reponse est positive, quel est leur devenir intracellulaire ? le cheminement est il identique pour les 2 proteines ? nous presentons une serie d'experiences biochimiques et immunomorphologiques qui demontrent que gp280 et gp330 sont internalisees et recyclees vers la membrane plasmique par l'intermediaire des tubules apicaux denses. Alors que ce travail etait en cours de realisation, le laboratoire de l'u64 a montre que gp280 avait la propriete de fixer les complexes facteur intrinseque gastrique-cobalamine. Ceci nous a amenes a entreprendre une troisieme serie d'experiences analysant le transfert de la cobalamine. Nous montrons i) qu'en presence de facteur intrinseque, l'epithelium visceral du sac vitellin est capable de transferer la cobalamine vers l'embryon, et que ce transfert peut etre inhibe par les anticorps polyclonaux et dans une certaine mesure monoclonaux anti-gp280 ; ii) qu'il existe in transfert specifique de cobalamine, independant de la presence de facteur intrinseque, a un niveau 10 fois plus faible que le precedent, sur lequel l'effet des anticorps anti-gp280 est incertain ; iii) in vivo le principal site de concentration de la cobalamine administree par voie intraveineuse ou par gavage est le lysosome renal ; iv) in vivo il existe un transfert embryonnaire de cobalamine, partiellement inhibe par les anticorps monoclonaux anti-gp280. Ces resultats suggerent, mais ne permettent pas de conclure formellement, qu'un deficit de l'apport embryonnaire en cobalamine pourrait etre a l'origine de malformations foetales.