Recherche Avancée

Thèse soutenue

Caractérisation d'une lignée de souris transgéniques portant le gène du récepteur β2-adrenergique humain : étude des conséquences de la surexpression des β2-ARs dans le foie

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Auteur / Autrice : Loubna Erraji
Direction : Jean-Gérard Guillet, Claudine André
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie moléculaire - Biochimie
Date : Soutenance en 1997
Etablissement(s) : Paris 5
Jury : Président / Présidente : Yves Goussault
Examinateurs / Examinatrices : Jean-Gérard Guillet, Claudine André, Yves Goussault, Johan Hoebeke, Denis Leiber, Jean-Pierre Dausse, Pascale Briand
Rapporteurs / Rapporteuses : Johan Hoebeke, Denis Leiber

Résumé

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Différents modèles de souris transgéniques surexprimant une des protéines du système -adrénergique (récepteur -ar, protéine gs ou -ark) dans le cur, ont été établis dans le cadre d'études des cardiomyopathies. Notre modèle de souris transgéniques (f28) porte le gène du 2-ar humain sous le contrôle de son promoteur naturel. Il a été produit dans le but d'avoir un modèle d'étude in vivo chez lequel on retrouve une distribution des 2-ars qui ressemble le plus possible a celle decrite chez l'homme. Dans une première partie de notre étude nous avons caractérisé chez les souris f28 l'expression du transgène dans plusieurs tissus cibles des catécholamines, en les comparants aux souris contrôles. Nous avons montré que le transgène est transcrit en messagers h2-ars spécifiques, dans le cur, le muscle, le poumon, le cerveau et le foie de souris f28, mais pas dans le rein et la rate. Leur profil de distribution tissulaire diffère de celui des arnm 2-ars de souris (m2-ars), et leur taille est supérieure à celle des messagers décrits chez l'homme et la souris. Ces messagers sont traduits en protéines, et les récepteurs transgéniques sont exprimés dans tous les organes de souris f28 exprimant les arnm transgéniques. L'expression la plus élevée est celle observée dans le foie ou les 2-ars représentent près de 95% des -ars totaux. Dans une deuxième partie de notre travail, nous avons montré dans le foie, que les récepteurs transgéniques sont capables d'interagir normalement avec les protéines gs de souris, et d'induire l'activation de l'adenylyl cyclase suite à la stimulation par l'agoniste -ar isoproterenol. Chez le rat, l'expression des 2-ars dans le foie varie en fonction de l'ontogenèse : elle est élevée chez le nouveau-né et faible chez l'adulte. Comme les 2-ars jouent un rôle physiologique très important dans cet organe, nous avons effectué une étude ontogénique du système -ar (-ars, protéine g, adenylyl cyclase). Nous avons montré que chez la souris contrôle on retrouve le même profil ontogénique d'expression des 2-ars et d'activité de l'adenylyl cyclase que ceux décrits chez le rat. En revanche, chez la souris f28, les 2-ars hépatiques sont fortement exprimes à tous les âges, tant chez le nouveau-né que chez l'adulte, et les réponses de l'adenylyl cyclase induites par l'agoniste, sont aussi fortement augmentées. Les souris f28 semblent présenter non seulement des altérations métaboliques mais aussi des altérations phénotypiques : une mortalité élevée des nouveau-nés, un déficit pondéral et un problème de coordination des mouvements des pattes arrière. Nous avons pu montrer que le phénotype de déficit pondéral est dû à l'expression du transgène, en particulier à la surexpression des 2-ars dans le foie. Finalement, nous avons utilise ce modèle de souris transgéniques pour mettre en évidence le rôle des 2-ars dans la régulation des phénomènes d'apoptose dans le foie. Il a été décrit que l'augmentation des taux d'ampc pouvait contrôler l'apoptose dans certains types cellulaires. Nous avons montre que les souris f28 qui surexpriment des 2-ars dans le foie, sont protégées contre l'apoptose induite par un anticorps anti-fas. Quant aux souris contrôles qui, normalement meurent suite à l'injection de cet anticorps, elles acquièrent une protection suite à l'administration de l'agoniste 2-ar clenbuterol. Le modèle de souris f28 est un outil de choix pour étudier l'impact physiopathologique de la modification de l'expression des 2-ars dans le foie, mais également dans d'autres tissus.