Recherche Avancée

Thèse soutenue

Les modules MAP kinases : rôle dans la prolifération cellulaire et étude de la spécificité d'activation

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Auteur / Autrice : Anne Brunet
Direction : Jacques Pouysségur
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences de la vie
Date : Soutenance en 1997
Etablissement(s) : Nice
Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université de Nice-Sophia Antipolis. Faculté des sciences
Jury : Président / Présidente : Jacques Pouysségur
Examinateurs / Examinatrices : Philip Cohen, Gilles Pagès
Rapporteurs / Rapporteuses : Marcel Doree, Jacques Ghysdael

Résumé

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P42 et p44 MAP kinases (MAPK), sont des sérine/thréonine kinases stimulées en réponse à tous les agents mitogènes. Les MAPK sont activées par phosphorylation d'une thréonine et d'une tyrosine, par la MAP kinase kinase (MKK), elle-même activée par la protéine kinase Raf. Le module Raf-MKK-MAPK transmet des signaux provenant de différentes classes de récepteurs convergeant au niveau de Ras. Après activation, les MAPK sont relocalisées dans le noyau où elles phosphorylent plusieurs substrats, tels des facteurs de transcription, et participent à la modulation de l'expression des gènes. Nous avons clone et exprimé la MKK de hamster chinois dans des fibroblastes. Par mutagenèse dirigée, nous avons identifié la sérine 222 comme un site majeur d'activation. Le remplacement de ce résidu par un acide aspartique, en mimant la présence du phosphate, conféré une activité constitutive à la MKK. L'expression de ces mutants constitutivement actifs dans des fibroblastes réduit le besoin en facteurs de croissance et provoque la transformation des cellules, indiquant que l'activation du module MAPK constitue une étape cruciale pour la prolifération cellulaire. Nos expériences préliminaires suggèrent que l'étape de relocalisation de la MAPK dans le noyau joue également un rôle clé dans la transmission des signaux mitogénique. Récemment, deux autres membres de la famille MAPK, nommes JNK et p38MAPK, ont été identifiés. Ils sont similaires à p42/p44MAPK mais interviennent dans la réponse au stress. Pour analyser comment la spécificité était maintenue entre ces modules MAPK, nous avons construit des chimères entre p38 et p44MAPK. L'étude de ces molécules montre que le domaine implique dans la spécificité d'activation, situe en N-terminal de la kinase, est dissocié du domaine conférant la spécificité de reconnaissance des substrats, situé en C-terminal. Cette dissociation nous a permis d'obtenir une chimère découplée qui redirige un signal de stress vers une réponse mitogénique in vivo.