Etude par mutagenèse dirigée de la relation entre la structure de la mésentéricine Y105 et sa fonction bactéricide à l'encontre de Listeria

Study by site directed mutagenesis of the relation between the structure of mesentericin y105 and its bactericidal activity against listeria

• Auteur / Autrice : Valérie Chamberland-Chanteloube
• Direction : Raymond Julien
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Limoges
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université de Limoges. Faculté des sciences et techniques

Mots clés

Mots clés contrôlés

Polymères -- Fusion

Spectrométrie de masse

Mutagenèse

Relations structure-activité

Peptides

Bactériocines

Listeria monocytogenes

Résumé

La mesentericine y105 est une bacteriocine de 7 acides amines secretee par la bacterie lactique leuconostoc mesenteroides. Elle appartient au groupe des bacteriocines actives sur le genre bacterien listeria et presente le motif consensus caracteristique tyr-gly-asn-gly-val- x- cys dans sa partie n terminale. Le peptide a ete produit chez escherichia coli par la technologie de l'adn recombinant. Il est purifie sous la forme d'une proteine de fusion contenant une sequence polyhistidine. La mesentericine recombinante est obtenue par clivage enzymatique (endoproteinase aspn) et chimique (le bromure de cyanogene) de la proteine de fusion, comportant 4 copies de la mesentericine. Elle est ensuite caracterisee par le sequencage n ter des acides amines et la mesure de sa masse par spectrometrie. Testee pour son activite anti-listeria, la mesentericine y105 recombinante est conforme au peptide naturel. La mesentericine reduite par le dithiothreitol a une activite identique a la mesentericine oxydee ce qui suggere que le pont disulfure naturellement present entre les residus cysteine 9 et 14 n'est pas indispensable a l'activite de la bacteriocine. Une strategie de mutagenese dirigee a ete developpee afin de determiner les roles respectifs de la region consensus n terminale et de la region asn#1#7#- asn#3#1 dont la structure predite est une helice amphiphile. Les mutations de la region n terminale engendrent des peptides dont l'activite anti-listeria est diminuee a des degres variables. Le motif consensus qui s'avere donc necessaire pour l'activite anti-listeria, pourrait etre implique dans la reconnaissance des cellules cibles. En revanche, la modification ou l'elimination de l'helice conduisent a des peptides inactifs. Sur la base de ces resultats, un modele d'action de la mesentericine sur les cellules de listeria est propose.