Régulations croisées entre signalisation lipidique et signalisation dépendant des nucléotides cycliques dans l'activation lymphocytaire : rôle de l'acide phosphatidique

= Cross-talk between lipid and nucleotide cyclic dependent signalling during lymphocyte activation : role of phosphatidic acid

• Auteur / Autrice : Alexia Girard
• Direction : Annie-France Prigent
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Lyon, INSA
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Interdisciplinaire Sciences-Santé (Villeurbanne ; 1995-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : LBP - Laboratoire de Biochimie et Pharmacologie (Lyon, Rhône1996-2003)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Acides phosphatidiques

Phospholipases

Nucléotides cycliques

Lymphocytes

Résumé

L'activité mitogénique des cellules mononucléées de sang périphérique humain (PBMC) augmente la production d'acide phosphatidique (PA) et stimule l'activité phosphodiestérase (PDE) des nucléotides cycliques. De plus, en système acellulaire, le PA stimule directement l'activité PDE. L'effet mitogénique du PA pourrait donc être dû à une activation des PDE conduisant à une diminution du taux intracellulaire d'AMPc, signal inhibiteur de la lymphoprolifération. Ce travail montre que la lectine mitogénique Concanavaline (Con A) augmente significativement la synthèse de PA dans les PBMC dès 5 min de stimulation, majoritairement par la voie PI-PLC/DAG-Kinase. D'autre part, l'étude en parallèle de la production de PA, des activités PDE et des taux d'AMPc induits par différents mitogènes dans une population cellulaire issue d'un même donneur montre qu'il existe une corrélation étroite entre les taux de PA et la réponse proliférative des cellules aux mitogènes. Enfin, les taux d'AMPc sont modestement, mais significativement diminués en réponse aux mitogènes. Le lien entre PA et réponse mitogénique a aussi été étudié dans un modèle expérimental mimant une situation physiologique particulière : le vieillissement. Il s'agit de PBMC enrichies en 12-HETE, dérivé monohydroxylé issu de l'acide arachidonique par la voie 12-lipoxygénasique, caractérisées par une réponse proliférative diminuée. Le 12-HETE étant décrit comme un inhibeur de DAG-Kinase, notre hypothèse était qu'il pouvait diminuer les taux de PA. Au contraire, nous avons montré une synthèse accrue de PA, par un mécanisme impliquant l'activation d'une PLD. De plus, cette activation ne dépend pas de PKC, met en jeu des tyrosine-phosphorylations, et probablement des sites de liaisons du 12-HETE de faible affinité, couplés à une protéine G.

Mitogenic activation of human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) rapidly increased both the IntraceUular phosphatidic acid (PA) level and cyclic nucleotide phosphodiesterase (POE) activity. In addition, PA directly stimulated PDE activity in an acellular system. Thus, the mitogenic properties of PA might be due to its ability to lower cAMP levels, a negative effector of lymphocyte activation, through PDE activation. This work shows that the mitogenic lectin Concanavalin A (Con A) significantly increases PA production in PBMC by a PIIPLC/DAG-Kinase pathway after 5 min of stimulation. When PA production, POE activities and cAMP levels were simultaneously determined in the same cells following activation by several mitogens, significant positive correlations could be established between PA level and PDE activities. Furthermore, agents able to impair the PA increase were also able to prevent the PDE activation. Finally, a modest but significant diminution of cAMP level was observed in response to mitogens. In a second part, we considered the relationship between PA and the mitogenic response in cells that were enriched with the arachidonic acid oxygenated metabolite, 12-HETE, involved in ageing. Given the 1ntimitogenic effect of 12-HETE for various types of cells including lymphocytes, and its reported inhibitory properties towards DAG-Kinase, we wondered whether an accumulation of 12-HETE in blood cells might result in an altered production of PA. On the contrary, 12-HETE was found to potentiate the PA formation induced by Con A, by a mechanism involving a PLD. This PLD activation does not involve PKC, but protein tyrosine-kinases; were found to be implicated. Finally, we demonstrated the presence of low-affinity binding sites for 12-HETE on PBMC, possibly linked to aG protein-coupled receptor.