Thèse soutenue

Étude de la flagelline de Clostridium tyrobutyricum ATCC 25755 : analyse biochimique et séquencage de la partie codante du gène

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Auteur / Autrice : Françoise Arnold
Direction : Roger Malcoste
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Microbiologie fondamentale et appliquée
Date : Soutenance en 1997
Etablissement(s) : Brest

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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Clostridium tyrobutyricum, bactérie anaérobie, contamine le lait sous forme sporale. Elle est responsable du défaut butyrique des fromages à pâte pressée cuite ce qui entraîne des pertes économiques importantes dans l'industrie fromagère d'où l'intérêt de sa détection. Un anticorps monoclonal (21e7-b12) produit au laboratoire reconnaît cette bactérie. Afin d'améliorer le protocole d'immunisation par l'utilisation d'antigènes définis, cette étude comporte deux étapes. Dans un premier temps, la caractérisation de l'antigène, reconnue par l'anticorps 21e7-b12 a permis de définir la flagelline, protéine constitutive du filament flagellaire comme étant le porteur de l'épitope. Cet épitope situé à la surface des filaments flagellaires est de nature glucidique. L’analyse biochimique de la flagelline montre une masse moléculaire apparente de 46 kda et un point isoélectrique apparent acide. Sa composition partielle en acides aminés présente un fort pourcentage en sérine et thréonine ce qui suggère la présence de liaisons o-glycosidiques. Les 23 premiers acides amines de la flagelline et les 13 acides aminés d'un peptide tryptique interne ont été déterminés par séquençage n-terminal. Cette protéine nous est apparue intéressante du fait de sa structure en acides aminés qui montre une variabilité pouvant être mise à profit pour détecter spécifiquement une espèce ou un genre bactérien. Dans ce but, des réactions d'amplification de la partie codante du gène de la flagelline ont été effectuées dans un second temps. Le clonage et le séquençage des produits amplifiés ont permis l'obtention des 377 acides aminés de la partie codante. La comparaison de la séquence de la flagelline de C. Tyrobutyricum avec celles des flagellines connues permet de déduire des séquences spécifiques de C. Tyrobutyricum qui serviront à la production d'anticorps monoclonaux. Ce modèle peut être élargi à d'autres espèces bactériennes flagellées.