Caractérisation et analyse d'un épitope T CD4 de la protéine IE1 du cytomégalovirus, et des fonctions effectrices de clones T CD4 anti-IE1

Characterization and analysis of a t-cd4 epitope of the human cytomegalovirus protein ie1. Analysis of the functional response of the cd4#+ t celle clone

• Auteur / Autrice : Nicolas Gautier
• Direction : C. DEPREVAL
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Déterminants antigéniques

Clonage moléculaire

Identification

Cytomégalovirus

Mots clés libres

Sciences biologiques fondamentales et appliquees, psychologie

Résumé

Les lymphocytes t cd4#+ specifiques de la proteine ie1 du cmv sont susceptibles de jouer un role important dans le controle d'une infection latente a cmv. L'analyse des interactions cmh/antigene/tcr et des fonctions effectrices exercees par les lymphocytes t cd4 est une etape dans la comprehension du role de la reponse t cd4 anti-cmv. Dans ce but, notre etude englobe la caracterisation et l'analyse d'epitopes t cd4 de la proteine ie1 du cmv, l'analyse des fonctions effectrices de ces clones t et le role des cytokines secretees. Une digestion enzymatique de la proteine recombinante gst-ie1(86-491) suivi d'une analyse par hplc-ms combinee a des tests de lymphoproliferation a permis l'identification d'un epitope presente par hla-dr8 correspondant au 14-mere 162-dkremwmacikelh-175. Un autre epitope ie1(86-105) presente par hla-dr3 a necessite la synthese de peptides chevauchants. La synthese d'analogues tronques, etendus et disubstitues par des residus alanine ont permis de definir la sequence optimale de l'epitope correspondant au 14-mere ie1(162-175) avec un core central de l'epitope situe sur la sequence ie1(164-171). Dans cette sequence, le domaine m166-w167 constitue le site principal d'interaction avec la molecule de cmh, et les domaines r164-e165 et m168-a169 les sites principaux d'interaction avec le tcr. D'autre part, la disubstitution des domaines c170-i171 et i158-v159 augmentent l'immunogenicite de l'epitope suggerant l'effet negatif de la chaine laterale de certains residus sur la reconnaissance t. Le profil de secretion de cytokines montre que les clones t cd4#+ diriges contre la proteine ie1 sont de type th1-th0. De plus, ils possedent une activite cytotoxique restreinte par hla-dr. Au laboratoire, nous avons montre que les cytokines secretees ifn-gamma et tnf-alpha agissent en synergie dans le controle du cmv in vitro. Enfin, l'analyse de la reponse du clone t cd4 specifique du peptide ie1(158-175) en presence des analogues disubstitues montre une correlation des differentes fonctions effectrices: proliferation, secretion de cytokines et cytotoxicite