Thèse soutenue

L'inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines p21Cip1 : étude des relations structure/fonctions

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Auteur / Autrice : Françoise Goubin
Direction : Bernard Ducommun
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie cellulaire
Date : Soutenance en 1996
Etablissement(s) : Toulouse 3

Résumé

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Le cycle cellulaire des cellules eucaryotes est gouverne par des complexes enzymatiques a activite proteine kinase: les complexes cyclines/kinases dependantes des cyclines (cycline/cdks). La proteine humaine p21cip1 est un inhibiteur des cdks. P21cip1 s'associe in vivo aux complexes cycline/cdk, dont elle inhibe l'activite kinase, et egalement au pcna (proliferating cell nuclear antigen). L'auteur a realise une mutagenese dirigee systematique de p21cip1. L'analyse de l'interaction in vitro entre ces proteines mutantes, recombinantes, et les proteines humaines cdk2, cycline d1, cycline a ou pcna, a permis de definir deux domaines independants de p21cip1 dont l'integrite est necessaire a l'interaction avec cdk2 et le pcna. Les mutations qui diminuent l'interaction avec cdk2 ou le pcna sont situees respectivement entre les acides amines 46 et 71 ou 144 et 163. Ces mutations reduisent egalement les interactions in vivo dans le systeme du double hybride chez la levure saccharomyces cerevisiae. Les parametres cinetiques de l'interaction entre la proteine p21cip1 sauvage, ou certaines proteines mutantes, et le pcna ont ete determines par la technique de resonance plasmonique de surface. La proteine p21cip1 et certaines proteines mutantes deficientes pour leur interaction avec le pcna et/ou cdk2 ont ete surexprimees de facon conditionnelle dans la lignee hela (carcinome cervical humain) et dans un organisme modele, la levure schizosaccharomyces pombe. Les niveaux de production des proteines obtenus dans la lignee hela ont ete insuffisants pour permettre la determination de leur activite in vivo. Chez s. Pombe, la proteine p21cip1 humaine s'associe au pcna et a p34cdc2, et sa surexpression inhibe la proliferation cellulaire de facon dependante de sa liaison au pcna