Transfert de genes medie par des polymeres cationiques

Gene transfer mediated by cationic polymers

• Auteur / Autrice : OTMANE BOUSSIF
• Direction : Jean-Paul Behr
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Mots clés

Mots clés libres

Sciences biologiques fondamentales et appliquees, psychologie

Résumé

Les vecteurs non-viraux de transfert de genes representent une alternative interessante aux vecteurs viraux. Nous avons montre que des composes tels que la polyethylenimine (pei), presentant des proprietes similaires aux lipospermines (pouvoir tampon dans les compartiments cellulaires acides, condensation de l'adn), sont efficaces pour le transfert de genes dans toute une serie de cellules eucaryotes. La polyethylenimine est une macromolecule organique possedant un grand potentiel de densite de charge cationique. Un atome sur trois correspond a un atome d'azote potentiellement protonable ce qui fait d'elle une veritable eponge a proton. Diverses ameliorations des protocoles d'utilisation de la lipospermine transfectam#t#m et de la pei (centrifugation des complexes sur les cellules, addition sequentielle du vecteur a l'adn, solution concentree de complexes), nous ont permis d'une part de former des complexes resistants au serum et d'autre part d'augmenter leur efficacite transfectrice d'un facteur mille. Nous avons en suite utilise le protocole optimise pour tester l'efficacite de nombreux polymeres cationiques, qui different par leur taille et par leur topologie. Nous avons ainsi montre que la pei 25 kda ramifiee et la pei 22 kda lineaire sont les plus efficaces, ne sont pas sensibles au serum, et gardent une bonne efficacite meme avec de faibles quantites d'adn. Nous avons enfin developpe un systeme de transfert de genes cible. En effet, pour le transfert de genes in vivo, il est preferable d'utiliser: i. Un systeme peu charge pour eviter l'opsonisation des complexes d'adn et l'activation du systeme du complement et ii. Un systeme specifique du tissu cible. Ainsi, nous avons montre que des complexes adn/pei lactosylee sont capables de transfecter selectivement les cellules (telles que les hepatocarcinomes) presentant a leur surface la lectine membranaire specifique du residu galactose. Les resultats obtenus au cours de ce travail montrent que la pei ciblee ou non, constitue un vecteur tres prometteur pour l'utilisation en therapie genique