Developpement des cellules des grains du cervelet de souris in vitro. Effets du bdnf et des conditions de culture sur l'evolution du recepteur nmda

In vitro development of mic cerebellar granule cells. Bdnf effects and culture conditions on the nmda receptor evolution

• Auteur / Autrice : MURIEL MUZET
• Direction : J.-L. DUPONT
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Le recepteur nmda est implique dans le developpement des cellules des grains du cervelet in situ. Ce recepteur est un heterodimere compose chez la souris de differentes sous-unites zetal et epsilon1-4, dont l'expression est regulee au cours du developpement. Nous avons etudie grace a la technique de patch-clamp l'evolution du recepteur nmda sur les cellules des grains dans deux types de culture, ainsi que l'action du bdnf, neurotrophine qui agit sur le developpement de ces neurones, sur les caracteristiques de ce recepteur. Dans le premier type de culture le cervelet entier est dissocie et les cellules sont maintenues dans un milieu soit avec 30 mm (k30), soit avec 5 mm (k5) de kcl. En k30, la densite du courant nmda augmente transitoirement pendant le developpement. L'application d'ifenprodil (10 microm) inhibe les reponses nmda plus fortement a div5 qu'a div10, suggerant que le sous-type epsilon2 est predominant durant les premiers jours de differenciation. Les cellules cultivees en k5 montrent une evolution de la densite du recepteur nmda fortement acceleree. Cependant, les cellules ne survivent pas plus de 6 jours, suggerant dans ce cas que le recepteur nmda devient neurotoxique. L'addition de bdnf (100 ng/ml) dans le milieu pendant les premiers jours de culture entraine une acceleration de la differenciation morphologique des cellules et surtout une augmentation de 30 a 50% de la densite de courant nmda. Dans le second type de culture, les cellules des grains sont recoltees directement a partir de la couche germinative externe. Dans ce cas, la densite du courant nmda augmente legerement, puis se stabilise rapidement a un niveau tres faible, comme in situ. Les autres conductances ca#2#+, na#+ et k#+ evoluent elles aussi de maniere tres proche de celle observee in situ. Ces resultats montrent que l'expression du recepteur nmda est fortement dependante des facteurs de l'environnement, avec un effet facilitateur du bdnf et une action protectrice du kcl