Proteolipides de la myeline du systeme nerveux central et du muscle cardiaque. Etudes physicochimiques a l'aide de peptides synthetiques

Proteolipids from the central nervous system myelin and from the cardiac muscle. Physicochemical studies using synthetic peptides

• Auteur / Autrice : Livia Poteur
• Direction : Elisabeth Trifilieff
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Anatomie et physiologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Les proteolipides sont des proteines solubles dans un melange chc13/meoh, 2/1, v/v. La premiere partie de ce travail concerne les deux proteolipides majeurs de la myeline du systeme nerveux central: plp et dm-20. Pour mieux connaitre la structure de ces proteines nous avons caracterise leurs cysteines (14 pour le plp et 12 pour le dm-20). Notre methode ne fait intervenir aucune etape en milieu basique et consiste en la caracterisation des peptides de digestion pepsique des proteolipides. Nous avons caracterise trois ponts disulfure pour le plp (32-34, 200-219, 183-227) et une cysteine libre (24) et un pont disulfure pour le dm-20 (147-191). On suppose que le plp permet de compacter et maintenir une distance constante entre les enroulements successifs de la membrane myelinique et ce via ses boucles extracellulaires. La boucle 200-219 serait un bon candidat pour jouer ce role. D'autre part cette boucle est le lieu de nombreuses mutations dans la maladie humaine dysmyelinisante de pelizaeus-merzbacher. Nous avons donc etudie les proprietes physicochimiques de la boucle 200-219. Nous avons montre en utilisant des peptides synthetiques et les proprietes de fluorescence du tryptophane en position 211 que la boucle peut s'inserer dans une bicouche lipidique et que les mutations n'affectent pas cette insertion. Nous avons montre egalement par dichroisme circulaire que la boucle n'est pas structuree et que les mutations n'entrainent aucune modification de structure. Ainsi la boucle 200-219 peut effectivement s'inserer dans une bicouche lipidique et contribuer a la compaction de la myeline. Par contre les mutations de la maladie de pelizaeus-merzbacher ne modifient pas les proprietes physicochimiques de la boucle. La deuxieme partie du travail concerne un proteolipide du muscle cardiaque: le phospholambane (plb). Le plb module l'activite de la pompe ca#+#+-atpase, responsable de l'alternance contraction-relaxation du muscle cardiaque, via sa phosphorylation-dephosphorylation en position 16. Les parties cytoplasmiques de la ca#+#+-atpase et du plb sont en interaction. Nous avons montre en utilisant des peptides synthetiques et le dichroisme circulaire que la phosphorylation en position 16 induit un changement de conformation de la partie cytoplasmique du plb. La levee de l'inhibition de la pompe par la phosphorylation du plb peut donc en partie s'expliquer par une modification de l'interaction entre les parties cytoplasmiques du plb et de la ca#+#+-atpase. Ce travail nous a parallelement conduit a utiliser une methode de phosphorylation chimique de peptides: la phosphorylation globale. Nous avons montre que cette methode est adaptee pour la phosphorylation de serines et de sites de phosphorylation encombres en utilisant le reactif adequat. Elle ne convient cependant pas dans notre cas pour la phosphorylation de plusieurs sites sequentiellement proches