Contribution à l'utilisation de rhodamines pour le ciblage intracellulaire : synthèse de rhodamnes aliphatiques et étude par imagerie de fluorescence

• Auteur / Autrice : Valérie Jeannot
• Direction : Jean-Marie Salmon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie. Chimie biologique
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Perpignan

Mots clés

Mots clés contrôlés

Technique

Microbiologie

Cytométrie de flux

Résumé

Le but de ce travail etait de determiner si la presence d'une chaine aliphatique longue - a la place du groupement methyle - sur la rhodamine 123 (r123), pouvait modifier la localisation intracellulaire de cette sonde. Cela devait permettre d'une part de mieux connaitre les mecanismes d'internalisation de la r123 dans les cellules, et d'autre part de determiner les facultes d'entrainement par la r123 de molecules jusqu'aux mitochondries. La premiere partie de ce travail a consiste a synthetiser de nouvelles molecules derivees de la r123. La purification de ces produits, apres leur synthese, a ete realisee par chromatographie sur colonne ouverte et leur structure a ete confirmee par spectrometrie de resonance magnetique nucleaire (rmn). Les proprietes spectroscopiques de ces nouvelles sondes fluorescentes ont ensuite ete etudiees en solution. Puis, l'etude de leur accumulation intracellulaire a ete realisee par videofluorimetrie. Il a ainsi pu etre montre que ces molecules - bien que portant une longue chaine aliphatique - marquaient, tout comme la r123, les mitochondries de cellules vivantes. Une deuxieme partie de ce travail a consiste a etudier l'accumulation intracellulaire de la r110, homologue acide de la r123, reputee d'apres la litterature ne pas marquer les cellules. Or, il a ete montre que non seulement la r110 etait capable de marquer les cellules mais que, de plus, elle marquait egalement les mitochondries de ces cellules avec toutefois une specificite beaucoup plus faible que la r123. L'ensemble de ce travail a donc permis de mettre en evidence une affinite tres forte du cycle anthranoyle de la r123 pour les mitochondries et aussi une importante faculte d'entrainement par la r123 de molecules jusqu'aux mitochondries. Cette etude a ensuite ete completee par une etude comparee de l'accumulation intracellulaire de la r123, des derivees de la r123 et de la r110 dans les cellules sensibles et dans les cellules presentant une resistance mdr.