Génétique moléculaire de la maladie de Hirschsprung : analyse d'un locus humain et d'un modèle murin de la maladie, le mutant ''Dom''

Molecular genetics of Hirschsprung disease : analysis of a human Hirschsprung locusand of a mouse model of the disease, the ''Dom'' mutant

• Auteur / Autrice : Aldamaria Puliti
• Direction : Michel Goossens
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génétique
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 12

Mots clés

Mots clés contrôlés

Chromosomes -- Cartes

Maladie de Hirschsprung

Résumé

La maladie de hirschsprung (hscr) est une affection congenitale de l'innervation intestinale, caracterisee par une absence de cellules ganglionnaires, derivees des cretes neurales, qui se traduit, chez les patients, par un megacolon congenital. L'observation de patients hscr presentant des anomalies chromosomiques variees et l'existence de modeles murins affectant des locus genetiques distincts, ont suggere que plusieurs genes pourraient etre impliques. Nous avons identifie un patient porteur d'une deletion chromosomique (de110q11. 2-q21. 2) suggerant la presence d'un gene de susceptibilite a l'hscr dans la region deletee. Deux hybrides somatiques retenant respectivement le chromosome 10 delete et le chromosome 10 non delete ont ete obtenus en utilisant une technique immuno-magnetique. Ce travail a permis l'isolement de marqueurs d'adn de la region deletee ensuite utilises pour les etudes de liaison genetique. Cela a egalement permis l'identification de genes candidats dans la region deletee parmi lesquels le gene ret pour lequel des mutations ont ete ensuite decrites chez certains patients hscr. Par l'etude de mutations naturelles et induites chez les souris et les etudes familiales, deux autres genes ont ete identifies: le recepteur endothelial (ednrb) et l'endotheline 3 (edn3). Un autre modele murin est le dominant megacolon (dom), localise sur le chromosome 15, mais pour lequel le defaut moleculaire n'a pas ete encore decrit. Dom est une mutation semi-dominante spontanee associee a une aganglionose intestinale et a des anomalies de la pigmentation. Notre but ultime est d'identifier le gene dom et de caracteriser son homologue humain. Nous avons tout d'abord etabli une carte genetique de haute resolution contenant le locus dom a l'aide de marqueurs microsatellites du chromosome 15. Ceci nous a permis de restreindre l'intervalle candidat a une distance genetique de 1. 6 +/- 0. 8 cm. Ensuite, nous avons etudie les consequences du defaut genetique chez les embryons atteints. Les embryons dom/+ sont identifies a l'aide des marqueurs microsatellites que nous avons selectionnes. L'etude de la migration des cellules de cretes neurales chez ces embryons au stade e13-e14 a montre qu'il existe un retard d'apparition de ces cellules dans l'intestin terminal. Par ailleurs, nous avons positionne des marqueurs specifiques de genes dans notre carte genetique. Ce travail a permis de retenir la region humaine 22q12-q13 comme homologue du locus dom murin. Cette region contient de nombreux genes candidats dont nous etudierons la fonction, l'expression tissulaire et la sequence chez les souris dom. Recemment, nous avons entrepris d'etablir la carte physique de la region du locus dom. Apres avoir etabli un contig de la region, nous rechercherons dans ces clones les eventuelles sequences transcrites dont l'implication dans le phenotype dom sera alors testee.