Caracterisation et etude fonctionnelle de la proteine nt-erabp1 chez nicotiana tabacum

Characterization and functional study of the nt-erabp1 protein in nicotiana tabacum

• Auteur / Autrice : Nathalie Leblanc
• Direction : Catherine Perrot-Rechenmann
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Afin d'etudier le mode de perception d'auxine dans les plantes de tabac, deux adnc de tabac, nt-erabp1 et nt-erabp2, codant pour une proteine homologue de la proteine de liaison d'auxine de mais (zm-erabp1) ont ete isoles. Les genes correspondants s'expriment preferentiellement dans les fleurs en cours d'elongation et dans les plantules. Neuf anticorps monoclonaux specifiques ont ete obtenus contre la proteine nt-erabp1 produite dans e. Coli. Ces anticorps, diriges contre au moins sept epitopes distincts de la proteine, offrent une couverture epitopique satisfaisante de la proteine nt-erabp1. Les neuf anticorps interferent avec la reponse electrique membranaire a l'auxine de protoplastes de tabac. Ces arguments demontrent l'implication de la proteine nt-erabp1 dans le systeme de perception d'auxine localise a la surface de la membrane plasmique. La plupart des anticorps inhibent la reponse electrique membranaire a l'auxine. En revanche, l'anticorps mab28 est capable, en absence d'auxine, de declencher cette reponse, mimant ainsi les effets de l'hormone. L'epitope reconnu par mab28 n'est inclus dans aucun des deux domaines de la proteine impliques dans la fixation de l'auxine. Cet effet agoniste pourrait resulter d'un changement de conformation de la proteine nt-erabp1 induit lors de la fixation de mab28. Ces resultats designent un nouveau site de regulation de la proteine nt-erabp1. La proteine nt-erabp1, et un peptide synthetique correspondant a sa region c-terminale, induisent l'hyperpolarisation de la membrane plasmique des protoplastes de tabac, reproduisant ainsi les effets des faibles concentrations en auxine. Afin de tester quels etaient les acides amines de la region c-terminale importants lors de l'interaction de la proteine nt-erabp1 avec la membrane plasmique, six proteines nt-erabp1, mutees dans le domaine c-terminal, ont ete etudiees. Pour obtenir des proteines correctement glycosylees, ces differentes proteines ont egalement ete produites en cellules d'insectes via baculovirus