Petite proteine g rac 2 : caracterisation moleculaire et implication dans l'activation du complexe enzymatique de la nadph oxydase

Small gtp-binding protein rac2: molecular analysis and involvement in the activation of nadph oxidase enzymatic complex

• Auteur / Autrice : OLIVIER DORSEUIL
• Direction : Gérard Gacon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Les petites proteines g ou proteines de la superfamille ras, sont des proteines de signalisation intracellulaire capables de lier les nucleotides gdp et gtp. J'ai participe au clonage de l'adnc du gene humain rac2, a l'epoque inedit et codant pour une nouvelle petite proteine g. Nous avons observe que l'expression de rac2 est restreinte aux tissus hematopoietiques. Rac1 et rac2 sont homologues a 92%. J'ai utilise des oligonucleotides antisens pour inhiber l'expression des genes rac. Nous avons ainsi pu montrer, pour la premiere fois en cellules entieres, l'implication des proteines rac dans l'activite nadph oxydase. Ce complexe enzymatique multifactoriel membranaire, caracteristique des phagocytes et des lymphocytes b, produit les anions superoxyde (o#2-) utilises comme agents bactericides lors des infections microbiennes. Aux etats-unis, j'ai poursuivi l'analyse de la nadph oxydase comme modele d'etude des petites proteines g. Nous avons pu montrer qu'une seconde petite proteine g, rap1a, est indispensable au fonctionnement du complexe enzymatique en cellules entieres. J'ai aussi participe a l'analyse du phenotype de la souris bcr-/-, qui montre que bcr est un regulateur physiologique de l'activite nadph oxydase via son activite gap (regulateur negatif) sur les proteines rac. J'ai aussi pu observer que rac activerait directement l'enzyme en modifiant la conformation du complexe membranaire de la nadph oxydase. De retour en france, j'ai participe a la recherche des interactions potentielles entre les differents facteurs de la nadph oxydase avec le systeme double-hybride chez la levure. Nous avons identifie le facteur p67phox comme etant la cible moleculaire des proteines rac au sein de la nadph oxydase. Nous avons aussi observe une interaction forte entre les facteurs p47phox et p67phox. Nos resultats ont permis d'etablir une premiere cartographie de l'interaction rac-p67phox et suggerent que rac2 est la proteine rac qui stimule in vivo l'activite nadph oxydase