Etude de la reactivite chimique des derives hydroxyles de l'ellipticine vis-a-vis des acides nucleiques ; formation d'adduits covalents et mecanisme d'action pharmacologique

Chemical reactivity of hydroxylated ellipticine derivatives to nucleic acids ; adducts formation and pharmacological mechanism of action

• Auteur / Autrice : Sophie Bernard
• Direction : Jean Aubard
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Les derives de l'ellipticine hydroxyles en position 9 presentent a la fois une meilleure activite cytotoxique et antitumorale. Leur activation oxydative genere des especes electrophiles tres reactives, capables en presence de nucleophiles biologiques, de conduire a la formation d'adduits covalents. Le systeme enzymatique modele peroxydase de raifort - peroxyde d'hydrogene, nous a permis d'etudier l'etape primaire de bioactivation oxydative du n(2)-methyl-9-hydroxy ellipticinium (nmhe). Nous avons pu mettre en evidence, par diffusion raman exaltee de surface, la formation d'une quinone-imine par comparaison avec le produit d'oxydation bi-electronique genere par voie electrochimique a partir de la 9-hydroxy ellipticine. L'etude de la reactivite de cette forme oxydee vis-a-vis de divers nucleos(t)ides a montre que les derives puriques sont beaucoup plus reactifs que les derive pyrimidiques, et tout particulierement les derives de l'adenine. De meme, en presence d'adn, la peroxydase catalyse l'oxydation de la nmhe et la formation d'adduits covalents qui presentent une intense fluorescence dans le visible. L'adenine est, la encore, le site preferentiel de la liaison covalente. L'analyse structurale du principal adduit forme nous a permis de montrer que le carbone en position 10 du chromophore ellipticinium reagit avec l'amine primaire en position 6 de l'adenine. Cet adduit covalent est stabilise par l'etablissement d'une liaison hydrogene entre l'amine devenue secondaire et le carbonyle. L'etude menee par microspectrofluorimetrie au niveau de cellules vivantes isolees, incubees en presence de nmhe, a montre que l'on retrouve uniquement dans les noyaux, un spectre d'emission de fluorescence identique a celui observe in vitro avec l'adn. La formation d'adduits covalents est donc un mode d'action possible des derives hydroxyles de l'ellipticine qu'il convient de prendre en consideration en vue du developpement pharmacologique de ces molecules antitumorales