Expression et fonction d'isoformes du recepteur de l'hormone de croissance et analyse de la generation de la formule soluble

Expression of the growth hormone receptor gene

• Auteur / Autrice : NAZARIO ESPOSITO
• Direction : J. FINIDORI
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Les recepteurs de l'hormone de croissance (gh) humain et de lapin ont ete clones en 1987 a peu pres en meme temps que le recepteur prolactine (prl). La comparaison de la structure des deux recepteurs montraient qu'ils appartenaient, de meme que leurs ligands, a la meme famille. Cette famille a ete definie sur la base d'homologies structurales. Une autre forme du recepteur a ete isolee a partir du placenta humain ; les travaux initiaux suggeraient que ce variant avait une expression tissu specifique et qu'il serait preferentiellement exprime dans les tissus foetaux et les cellules indifferenciees. L'analyse en reverse-transcription/pcr que nous avons menee sur un echantillon relativement large de biopsies hepatiques ; sur des foies normaux ou sur des foies de malades atteints d'hepatocarcinomes associes ou non a une cirrhose, a montre les resultats suivants: les deux formes de recepteurs de l'hormone de croissance (delete ou non) sont exprimees dans le foie avec un rapport variable en faveur de l'une ou l'autre forme selon les individus, sans que l'on puisse trouver de relation avec un degre de differentiation cellulaire. Nous montrons que des etudes par rt/pcr revelent l'existence de 2 variants dans le foie humain et la lignee lymphocytaire im9, que nous avons nomme ghr383 et ghr427. Ces variants se distinguent par une deletion partielle ou complete de l'exon 9 et par un changement de cadre de lecture en aval de la deletion qui ajoute un codon stop prematurement. Les proteine deduites de cette sequence correspondent a des recepteurs tronques dans la partie cytoplasmique, ne contenant plus la boite 1 montree necessaire a la transmission du signal hormonal. Nous avons ensuite construit un plasmide contenant le cdna du recepteur variant ghr427. La transfection de cellules 293 et l'etude fonctionnelle de cette construction suggere que cette isoforme peut avoir un role physiologique in vivo malgre sa faible abondance, en generant de la ghbp et en interagissant avec le ghr sauvage. L'analyse genetique de deux cas de syndrome de laron avec une activite de liaison de la gh normale dans le plasma, a permis d'identifier une mutation ponctuelle avec substitution en position 152 d'un acide aspartique par une histidine. Nous avons reproduit cette mutation dans les adnc codant pour le recepteur gh de l'homme, du macaque et du rat. L'adnc mute a ete transfecte dans des cellules 293. Aucune modification de la dimerisation du recepteur n'a ete observee dans les trois especes. Par ailleurs, chez le rat, cette mutation n'entraine pas d'alteration de la capacite d'induction de la transcription du recepteur. Par contre, l'expression et l'activite de transcription des recepteurs humain et macaque mutes, sont alterees et, sont ainsi responsable de l'extreme resistance a la gh constatee chez ces patients