Serodiagnostic de la leishmaniose viscerale a l'aide de peptides synthetiques couples a un transporteur

Serodiagnosis of visceral leishmaniasis using synthetic peptides coupled to a carrier

• Auteur / Autrice : Christel Fargeas
• Direction : Roger Mayer
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Orléans

Résumé

Le serodiagnostic de la leishmaniose par dosage immunoenzymatique elisa est couramment realise a l'aide d'un extrait brut de parasites leishmania. Bien que sa sensibilite soit elevee, ce diagnostic souffre d'un manque de specificite qui entraine de nombreuses reactions croisees avec d'autres agents pathogenes. Ainsi, des efforts importants sont actuellement effectues dans le but d'augmenter la specificite du serodiagnostic, notamment grace a des antigenes purifies ou a des proteines recombinantes specifiques. Des peptides dont la sequence est issue de proteines antigeniques ont recemment ete utilises avec succes dans le domaine du diagnostic de maladies parasitaires. Nous nous sommes proposee, au cours de ce travail, d'utiliser des peptides derives de proteines des parasites l. Donovani et l. Chagasi pour la mise au point d'un serodiagnostic de la leishmaniose viscerale. Les peptides ont ete synthetises sur support solide, purifies par clhp, caracterises par analyse d'acides amines et spectrometrie de masse, puis couples a un transporteur pour augmenter leur adsorption sur les plaques de microtitration utilisees pour le serodiagnostic. Dans un premier temps, des peptides hydrophiles issus d'une proteine de l. Donovani ont ete choisis puis couples a la sah grace a un agent reticulant, le glutaraldehyde. Lors des experiences preliminaires, nous avons observe que la sah reticulee, en l'absence de peptide, reagissait avec les serums de malades infectes par les parasites leishmania et trypanosoma. Nous avons donc entrepris la synthese des conjugues par l'intermediaire de reactifs heterobifonctionnels permettant un couplage covalent uniquement entre le peptide et la sah. Le dosage elisa utilisant ces conjugues individuellement s'est revele moins sensible que le dosage realise avec les extraits bruts mais plus specifique. L'utilisation d'un melange de deux conjugues comme antigene a permis d'augmenter a la fois la sensibilite et la specificite de l'elisa. Dans un deuxieme temps, 4 peptides dont la sequence provient de l'antigene k39 de l. Chagasi ont ete synthetises sous forme de melange de peptides rendant compte des degenerescences, puis couples a la sah par une liaison thioether entre un n-bromacetyl-peptide et des fonctions thiol greffees sur la sah. La sensibilite du dosage elisa est legerement inferieure a celle du dosage avec les extraits bruts mais la specificite est largement augmentee essentiellement grace a la diminution des reactions croisees avec la leishmaniose cutanee