Recherche Avancée

Thèse soutenue

L'endopeptidase 3. 4. 24. 16 : dosage fluorimétrique et inhibiteur spécifique, distribution tissulaire et cérébrale, ontogenèse et clonage de l'ADN complémentaire

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Auteur / Autrice : Pascale Dauch
Direction : Frédéric Checler
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences de la vie
Date : Soutenance en 1996
Etablissement(s) : Nice
Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université de Nice-Sophia Antipolis. Faculté des sciences
Jury : Président / Présidente : Jean-Pierre Vincent
Examinateurs / Examinatrices : Patrick Auberger, Bernard Roques
Rapporteurs / Rapporteuses : Paul Cohen, Pierre Corvol

Résumé

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L'étude du métabolisme de la neurotensine dans différents tissus d'origine centrale et périphérique a permis de mettre en évidence une nouvelle activité peptidasique : l'endopeptidase 3. 4. 24. 16, appartenant à la famille des métallopeptidases. Afin de pouvoir doser l'enzyme de manière simple et rapide, un dosage fluorimétrique a été mis au point grâce à l'utilisation d'un substrat fluorimétrique et d'un inhibiteur spécifique, le dipeptide Pro-Ile. Ce dosage fluorimétrique de l'endopeptidase 3. 4. 24. 16 est utilisé dans toutes les études concernant la caractérisation de la peptidase et permet de mesurer son activité dans des préparations brutes d'homogénats. Ainsi, il a été possible d'établir chez le rat, la distribution tissulaire, la cartographie précise de l'enzyme déterminée dans 60 aires cérébrales, et le profil ontogénétique établi dans le cerveau de souris. Le clonage de l'endopeptidase 3. 4. 24. 16 a été entrepris à l'aide d'un antisérum polyclonal développé contre l'enzyme cérébral, par le criblage d'une banque d'ADNc de cerveau de rat. Un clone de 2448 pb a été obtenu dont la plus longue phase de lecture ouverte code pour une protéine de 704 acides aminés correspondant à un poids moléculaire de 80 kDa. La protéine exprimée par des cellules eucaryotes transfectées par l'ADNc est reconnue par l'anticorps polyclonal et présente les mêmes spécificités de substrat, ainsi que la même sensibilité à l'inhibiteur Pro-Ile que l'enzyme purifié. La séquence protéique déduite de l'ADNc possède le site consensus des métallopeptidases à zinc : HExxH.