Mise en place d'outils génétiques dans la levure Schwanniomyces occidentalis

Development of genetic tools in the yeast schwanniomyces occidentalis

• Auteur / Autrice : Patricia Costaglioli
• Direction : Jean-Michel Masson
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie. Biotechnologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Toulouse, INSA

Mots clés

Mots clés contrôlés

Fermentation

Technique

Plasmides

Biotechnologie

Levures (botanique)

Bactéries aérobies

Résumé

Schwanniomyces occidentalis presente des caracteristiques qui pourraient faire de cette levure un nouveau systeme d'expression efficace pour la production a grande echelle de proteines heterologues. En effet contrairement a saccharomyces cerevisiae cette levure secrete, des proteines de taille importante dans le milieu extra-cellulaire, n'hyperglycosyle pas les proteines secretees, ne produit pas de quantite mesurable de proteases et se developpe sur des milieux peu onereux. Enfin, schwanniomyces occidentalis possede un metabolisme non fermentaire en aerobiose et presente une croissance rapide. Elle atteint une densite cellulaire maximale importante permettant une production de proteines importante. A l'heure actuelle, le developpement de schwanniomyces occidentalis, en tant que systeme hote, necessite au prealable la construction d'un vecteur d'expression efficace (marqueurs de selection, origines de replication, promoteurs et terminateurs de transcription). Nous disposions d'un vecteur comportant un marqueur d'auxotrophie (gene ade2) ainsi qu'une origine de replication autonome. Nous avons dans un premier temps, mieux caracterise ce vecteur et mis au point une methode de transformation efficace dans s. Occidentalis. Afin d'evaluer la possibilite d'utiliser s. Occidentalis comme systeme hote, nous avons isole la region 3' non codante ainsi que differents fragments (0,6 kb, 1,2 kb et 3,4 kb) de la region 5' non codante, du gene codant pour l'invertase. Une fois les conditions de derepression de ce gene etablies, nous avons utilise le gene gus, facilement dosable, comme systeme rapporteur. Nos etudes indiquent que ce gene n'est pas approprie dans s. Occidentalis. Neanmoins, nous demontrons que le fragment de 1,2 kb est necessaire et suffisant pour l'expression regulee du gene rapporteur dans s. Cerevisiae, dans les conditions de derepression precedemment definies