Recherche Avancée

Thèse soutenue

Effets de la pression sur les propriétés catalytiques et la stabilité des cholinestérases

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Auteur / Autrice : Cécile Clery
Direction : Patrick Masson
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie
Date : Soutenance en 1996
Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Résumé

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Les cholinesterases sont les cibles principales des organophores (neurotoxiques de guerre, pesticides) ; ces composes agissent selon un mecanisme d'inhibition irreversible. Les enzymes inhibees par les organophosphores, ayant subi une reaction de dealkylation (mecanisme de vieillissement) ne peuvent etre reactivees par des composes nucleophiles. La mise au point d'une therapeutique plus efficace de l'intoxication organophosphoree est conditionnee par une meilleure comprehension du fonctionnement, de la structure et de la stabilite des cholinesterases. L'action de la pression, en perturbant l'activite enzymatique et la dynamique conformationnelle permet de mieux apprehender les forces qui gouvernent la stabilite des enzymes. Nous avons defini deux axes de recherches pour l'etude de l'action des hautes pressions sur une cholinesterase modele, la butyrylcholinesterase humaine. Dans un premier temps, les analyses fonctionnelles comportent en particulier la perturbation par la pression des cinetiques d'hydrolyse d'esters neutres, des reactions de phosphonylation de la butyrylcholinesterase par le soman. Ces investigations realisees en fonction de la temperature, de la composition du milieu et/ou de differents effecteurs modulateurs de l'activite enzymatique, ont permis de mettre en evidence les changements de conformation et d'hydratation associes au fonctionnement de l'enzyme. Dans un deuxieme temps, les analyses structurales comparant la plasticite conformationnelle de la buche native ou vieillie par les organophosphores apportent des informations sur la nature et l'etendu des alterations induites par la reaction de dealkylation. Parallelement, nous avons etudie le processus de denaturation de la butyrylcholinesterase par la pression et mis en evidence des intermediaires de type globule fondu dans ce processus