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Thèse soutenue

Mise au point d'une méthode de transformation génétique de l'épinard (Spinacia oleracea L. ) en vue de l'obtention de plantes à teneur réduite en nitrate

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Auteur / Autrice : Lahcen Askouk
Direction : Michel Branchard
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie cellulaire
Date : Soutenance en 1996
Etablissement(s) : Brest

Résumé

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Cette étude avait pour but la mise au point d'un protocole de transformation génétique de l'épinard (Spinacia oleracea L. ) et son application à l'introduction du gène de la nitrate réductase de tabac. De tels résultats doivent permettre l'étude de l'impact de ce gène sur le métabolisme de l'azote de l'épinard ainsi que l'obtention de plantes à teneur réduite en nitrate. Au cours de l'expérimentation, le transfert direct utilisant le canon à particules et le transfert indirect via les agrobactéries ont été développés. Transfert direct: l'application de cette technique à différents explants a permis l'obtention de massifs cellulaires et de bourgeons. Ces structures présentent l'activité béta-glucuronidase. Cependant, aucune plante transgénique n'a été actuellement obtenue. Transfert via agrobacterium: la sensibilité de l'épinard aux souches sauvages d'Agrobacterium tumefaciens a été démontrée par l'obtention de tumeurs de type crown gall et de tumeurs avec pointes racinaires. Par contre, l'utilisation de souches désarmées a été sans succès, probablement en raison de l'incapacité de la maîtrise des conditions de régénération à partir des cellules transformées. L’infection de jeunes plantes décapitées avec la souche A4 GUS d'A. Rhizogènes a induit la formation de racines de type hairy root. A partir de ces racines, des plantes ont été néoformées par les voies organogène et embryogène. La mise en évidence d'opines et les analyses d'activité beta-glucuronidase, d'amplification d'une séquence du gène GUS par PCR et d'hybridation de type southern blot ont démontré la nature transgénique des plantes obtenues. Ces plantes sont fertiles et donnent une descendance R1 GUS+ L’application de cette méthode a l'introduction du gène nitrate réductase a conduit a l'obtention de pousses feuillées présentant le caractère NR+ après analyse PCR.