SPOT14 : clonage du gène chez la souris : étude des régulations de ce gène par RT-PCR quantitative

Mouse spot 14 gene : cloning and studies on its regulation through quantitative rt-pcr

• Auteur / Autrice : Hacène Khiri
• Direction : Janine Torresani
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie. Nutrition, aspects moléculaires et cellulaires
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 3

Résumé

Le sujet de cette these s'inscrit dans le cadre des recherches ayant pour objet de mieux cerner les bases moleculaires des regulations nutritionnelles et hormonales des enzymes impliquees dans la lipogenese. Le gene choisi comme modele, spot14 (s14) est un gene dont l'expression est restreinte aux tissus lipogeniques et dont le produit, de fonction jusqu'a present inconnue, est probablement implique dans la lipogenese. Dans cette these, sont presentes i) le clonage du gene murin, ii) la mise au point d'un protocole de quantification des arn messagers par une methode de rt-pcr quantitative originale qui repose sur l'utilisation de 2 standards internes apportes par une preparation d'arn totaux provenant d'une autre espece, et iii) l'etude des regulations de l'expression de ce gene dans les lignees preadipocytaires, 3t3-l1 et ob17. Les sequences du rat et de la souris (-1580/+501) presentent une tres forte homologie et l'etude des sequences -220/+19 et -110/+19 par transfection des cellules ob17 montre une activite promotrice forte. Dans les lignees de preadipocytes, l'arnm-s14 n'est retrouve que dans les cellules differenciees, dans lequelles son taux est augmente par l'acide retinoique ou la dexamethasone, et diminue par un analogue non metabolisable du camp qui, de plus, exerce un effet dominant negatif. La triiodothyronine ajoutee au debut du processus de differenciation des cellules, module les regulations d'expression de ce gene en potentialisant les effets du camp