Analyse physico-chimique de glycolipides utilisés pour l'étude de protéines membranaires

Physico-chemical analysis of glycolipides used for study of membrane proteins

• Auteur / Autrice : Florence Costes
• Direction : Isabelle Rico-Lattès
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie moléculaire et supramoléculaire
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Huile de soja

Surfactants

Glycolipides

Micelles

Protéines membranaires

Lipoxygénases

Résumé

Du fait de leur caractere generalement non denaturant vis a vis des materiaux biologiques, les tensioactifs derives de sucres sont largement utilises en recherche fondamentale pour l'extraction et la purification des proteines membranaires amphiphiles, etape essentielle pour la determination de leur structure et de leur role. Nous avons envisage de comparer les proprietes tensioactives de nouveaux amphiphiles a ceux utilises a present dans ce domaine, ainsi que leur mode d'agregation. Des syntheses simples, sans protection et deprotection du sucre, nous ont permis de synthetiser les tensioactifs suivants: les n-alkylamino-1-deoxy-1-lactitols, les n-acetyl n-alkyllactosylamines, les n-alkyllactobionamides. Afin d'etudier le mode d'agregation dans l'eau de ces tensioactifs, nous avons tout d'abord effectue une analyse conformationnelle de la n-acetyl n-alkyllactosylamine par rmn #1h et #1#3c, et par modelisation moleculaire. Nous avons ensuite entrepris l'etude de la micellisation de tous ces tensioactifs en mesurant les concentrations micellaires critiques par tensiometrie, et le nombre d'agregation des micelles formees par plusieurs methodes: fluorescence statique, fluorescence dynamique et diffusion des neutrons et des rayons x. Cette derniere technique permet aussi de preciser la forme de ces micelles. De plus, les phases cristal-liquide formees en milieux concentres par ces tensioactifs ont ete mises en evidence par diffraction des rayons x et observation au microscope optique. Le comportement de ces glycolipides dans l'eau a ete compare a celui de tensioactifs homologues utilises pour l'extraction de proteines membranaires: le dodecylmaltoside et l'hecameg. Tous ces composes presentent des proprietes tensioactives comparables. Les micelles formees sont soit des micelles spheriques, soit des ellipsoides aplatis mis en evidence pour la premiere fois, soit des micelles filamenteuses. Enfin, la reactivite et la stabilite d'une proteine membranaire extrinseque, la lipoxygenase de soja, en milieu aqueux, en presence de ces amphiphiles ont ete etudiees. Ces derniers se sont reveles de bons agents emulsionnants de l'acide gras, comparables au tween 20. La plupart affectent moins l'activite de l'enzyme au cours du temps que le tween 20. En premiere analyse, la forme des micelles apparait comme un parametre important