Isolement et caracterisation d'une nouvelle homeoproteine interferant fonctionnellement avec un element de reponse retinoique

Isolation and characterization of a novel homeobox protein which functionally interferes with a retinoid responsive motif

• Auteur / Autrice : ERIC BERTOLINO
• Direction : C. KEDINGER
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

De maniere a verifier existence de nouveaux facteurs nucleaires intervenant dans la regulation des genes sous le controle de l'acide retinoique, nous avons entrepris de cribler par southwestern proteine -dna) une banque d'expression d'adn complementaire (adnc) de foie embryonnaire humain par une sonde d'adn correspondant a un element de reponse (re) lie fortement par les recepteurs d'acide retinoique 9-cis (rxr). Une analyse de leurs sequences a permis de conclure a la decouverte d'un nouveau membre de la famille des homeoproteines, nomme i-rxr. L'homeodomaine de i-rxr, que nous avons appele tale, appartient au groupe des homeodomaines atypiques compose de 63 acides amines. Nous avons pu demontrer que cette nouvelle homeoproteine ainsi que son homeodomaine isole se liaient specifiquement a une sonde crbpii-rxre sur le demi-site partiellement conserve n 1. Les proteines i-rxr et rxr se fixent de maniere mutuellement exclusive. La liaison de i-rxr avait comme consequence d'abolir la liaison cooperative de rxr par encombrement sterique. Les deux sites proximaux n 2 et 3 a forte affinite pour rxr etaient directement affectes car chevauchant partiellement la sequence reconnue par i-rxr. La cotransfection de vecteurs d'expression de rxr et de i-rxr conjointement avec un gene rapporteur sous le controle du crbpii-rxre, dans les lignees cellulaires u87 (glioblastome) ou cos-1, a permis de demontrer un effet inhibiteur sur l'activation de la transcription dependante de rxr ainsi que sur le niveau basal de transcription. C'est pourquoi nous avons decide de nommer cette homeoproteine i-rxr (inhibiteur de rxr). Nous avons montre par hybridations in situ que l'expression de mi-rxr est restreinte. Dans le cerveau mi-rxr est detectable dans la zone neuroepithelial en proliferation dans l'hippocampe ainsi que dans la couche externe du cervelet composee de cellules en mitose