Role de la sous-unite de 131 kda dans l'architecture et le fonctionnement du facteur de transcription tfiiic de la levure saccharomyces cerevisiae

Role of the 131 kda subunit in determining the architecture and function of the yeast saccharomyces cerevisiae tfiiic transcription factor

• Auteur / Autrice : NATHALIE CHAUSSIVERT
• Direction : Claude Kedinger
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Ce travail presente l'etude du gene tfc4, codant pour la sous-unite de 131 kda (t131) du facteur de transcription tfiiic de la levure saccharomyces cerevisiae. L'analyse de la sequence a revele la presence de motifs homologues aux motifs bhlhzip et tpr, ainsi qu'une region n-terminale acide. Ces differents motifs ont ete etudies par mutagenese dirigee. La plupart d'entre eux sont importants pour la structure et/ou la fonction de la proteine. Les mutations thermosensibles dh1, dbasic2 et dtpr8 ont ete utilisees pour tester des suppresseurs multicopies. Certains de ces suppresseurs appartiennent au systeme de transcription: le gene pcf4/brf1/tds4 codant pour la sous-unite de 70 kda du facteur tfiiib, le gene spt15 codant pour la proteine tbp, le gene tfc1 codant pour la sous-unite t95 de tfiiic. Les facteurs tfiiic-dh1, tfiiic-dtpr7 et tfiiic-dtpr8 ont ete etudies in vitro. L'assemblage de tfiiib au complexe tfiiic?adn est deficient in vitro pour tfiiic-dh1 et tfiiic-dtpr8. La mutation letale dtpr7 n'affecte pas le comportement de tfiiic-dtpr7in vitro. Nous avons fusionne les proteines tfiiib#7#0, t131, t131-dn2, -dtpr3, -dtpr7, -dtpr11 et -dloop au domaine de liaison a l'adn de la proteine gal4 et les avons testees dans un systeme de transcription du gene u6. Tfiiib#7#0 et t131 sont capables d'activer la transcription du gene u6 via des sites gal4 a differentes positions dans la sequence. T131-dn2 peut activer la transcription via des sites gal4 en +88 du gene u6. Nous avons etudie les interactions proteine-proteine entre les constituants du systeme de transcription de classe iii. Nous avons mis en evidence une interaction entre les sous-unites t131 et tfiiib#7#0 de tfiiic et tfiiib et entre les sous-unites tbp et tfiiib#7#0 de tfiiib. Les domaines proteiques impliques ont ete caracterises