L'adn topo-isomerase iv de staphylococcus aureus : identification, caracterisation biochimique et, etudes biochimiques et genetiques sur la resistance aux fluoroquinolones

Dna topoisomerase iv from staphylococcus aureus : identification, biochemical characterisation, and biochemical and genetic studies on resistance to fluoroquinolones

• Auteur / Autrice : LUCIA FERRERO
• Direction : Denis Crouzet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées. Psychologie. Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

La resistance aux fluoroquinolones est devenue un probleme majeur chez les staphylococcus aureus, que ces souches soient ou non d'origine nosocomiale, ou qu'elles soient resistantes ou non a la methicilline. Nous nous sommes atteles dans ce travail a comprendre le mecanisme par lequel s. Aureus devient resistant aux fluoroquinolones. Deux genes isoles de s. Aureus. Grla et grlb ont ete clones et, apres caracterisation biochimique et genetique, identifies comme les genes de structure de l'adn topo-isomerase iv (une homologue de la gyrase) de s. Aureus. La qrdr de gyra et de la region correspondante de grla chez les souches resistantes de s. Aureus, provenant de milieux hospitaliers, ou selectionnees in vitro sur de faibles concentrations en ciprofloxacine ont ete analysees : une mutation ponctuelle existe dans grla chez toutes les souches examinees. Cette mutation conduit a une substitution de la ser80 (correspondant a la ser83 de gyra d'e. Coli) en tyr ou phe. Une mutation dans gyra et/ou une diminution de l'accumulation intracellulaire de norfloxacine est trouvee chez les souches ayant une cmi 16 mg/l de la ciprofloxacine. L'analyse de grla/grlb sauvage dans le test d'inhibition par certaines fluoroquinolones de l'activite de desenchevetrement de l'adn de kinetoplastes, a montre que l'enzyme est une cible de ces produits. De plus, l'inhibition d'une enzyme pure grlaser80tyr/grlb montre que cette enzyme est de 10 a 80 fois plus resistante aux fluoroquinolones testees que l'enzyme sauvage. L'ensemble de ces resultats obtenus in vivo et in vitro demontrent que l'adn topo-isomerase iv de s. Aureus est la cible primaire des fluoroquinolones.