Role de la thrombospondine dans la dissemination tumorale. Etude in vitro de la capacite des lignees cellulaires epitheliales d'adenocarcinomes mammaires humains a synthetiser, lier et adherer a la thrombospondine

Studies on adenocarcinoma cells on the capabilities to synthesize bind and adhere to thrombospondine

• Auteur / Autrice : FRANCESCA INCARDONA
• Direction : C. LEGRAND
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés libres

Sciences medicales

Résumé

Au cours du processus metastatique, les cellules cancereuses s'echappent de la tumeur primaire, accede au systeme circulatoire pour aller envahir a distance des tissus hotes. Dans notre etude nous avons recherche le role de la thrombospondine (tsp) dans la dissemination metastatique. La tsp est une glycoproteine de masse moleculaire 450 kda secretee par les plaquettes activees et par un grand nombre de cellules normales et tumorales intervenant dans de nombreuses fonctions biologiques et pathologiques. Dans la premiere partie de cette etude, nous avons montre que les cellules d'adenocarcinome mammaire humain mda-mb-231 synthetisent et secretent la tsp et que l'expression de la tsp est stimulee aux faibles densites cellulaires. Nous avons montre a l'aide du cytometre de flux la presence de sites de liaison certains deja occupes par la tsp endogene, d'autres libres qui ont ete quantifies par la liaison de la tsp purifiee radiomarquee a l'iode 125. L'analyse de scatchard a demontre la presence de n=1,2 x 10#6 sites/cellule avec un kd=23 nm. La liaison est dependante des ions calcium et inhibee par l'heparine. Nous avons egalement montre que la tsp est un bon substrat d'adhesion pour ces cellules. Dans la deuxieme etude nous avons montre que lors de l'etape critique de l'extravasation, la tsp permet le pontage entre les cellules tumorales et les cellules endotheliales et ces interactions in vitro, sont inhibees par un anticorps anti-tsp. Dans la troisieme etude, nous avons identifie les domaines moleculaires impliques dans l'interaction de la tsp a ses recepteurs de la surface cellulaire. Nous montrons que l'extremite nh#2-terminale de la tsp ainsi que les sequences repetitives de type i et de type ii participent aux interactions avec les recepteurs membranaires. L'inhibition de la liaison de la tsp radiomarquee par divers glycosaminoglycannes, et par des traitements avec des glycosidases a permis d'identifier le recepteur comme etant un proteoglycanne a chaine d'heparane et chondroitine sulfate. L'inhibition de la synthese des proteoglycannes par un traitement des cellules avec du chlorate et deux b xylosides (nx et dx) a permis de confirmer ces resultats. Nous avons egalement montre qu'un recepteur de type integrine intervient dans l'interaction des cellules avec la tsp adsorbee