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Thèse soutenue

Determination de la structure tridimensionnelle du complexe ef-tu : ef-ts, facteurs d'elongation polypeptidique d'escherichia coli, par la diffraction des rayons x

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Auteur / Autrice : TAKEMASA KAWASHIMA
Direction : Paul Vigny
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

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Le complexe des facteurs de l'elongation polypeptidique ef-tu et ef-ts d'escherichia coli a ete cristallise afin d'etudier le mecanisme d'echange nucleotidique sur le plan structural, par la cristallographie aux rayons x. Les cristaux obtenus dans des solutions de peg 6000 peuvent se presenter sous deux formes morphologiquement similaires. L'une diffracte a basse resolution, l'autre a haute. La diffusion de vapeur d'eau peut convertir une forme en l'autre, et cette propriete faisait obstacle a la determination de la structure. La mise au point d'un protocole approprie de trempage et la collecte les donnees a temperature cryogenique, a permis d'obtenir des jeux de donnees complets de la forme diffractant a haute resolution, ce qui a conduit a la structure tridimensionnelle du complexe ef-tu:ef-ts a une resolution de 2. 5 angstroms. Le complexe est une molecule tetramerique contenant deux exemplaires de chaque facteur d'elongation. Les deux molecules de ef-ts forment un dimere et il n'y a que peu de contacts entre les deux molecules de ef-tu, ce qui est formule par 2ef-tu: ef-ts2. Ef-ts est en contact avec les domaines 1 et 3 de ef-tu. L'interaction de ef-ts avec ef-tu montre que le relargage du nucleotide guanidique est principalement du a l'alteration du site de fixation du magnesium par l'insertion de la chaine laterale d'une phenylalanine, appartenant a un motif conserve, dans la structure de ef-tu. Des sequences qui s'apparentent a ce motif peuvent etre identifiees dans d'autres facteurs d'echange nucleotidique