Caracterisation serologique, biochimique et moleculaire d'ascochyta pisi, mycosphaerella pinodes et phoma medicaginis var. Pinodella, agents pathogenes du pois

Serological, biochemical and molecular characterization of ascochyta pisi, mycosphaerella pinodes and phoma medicaginis var. Pinodella, pea pathogens

• Auteur / Autrice : SAMAR FARIS-MOKAIESH
• Direction : Martine Boccara
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Les cultures de pois, a travers le monde, subissent des degats importants par suite d'attaques de l'un ou de plusieurs des trois agents pathogenes suivants: ascochyta pisi, mycosphaerella pinodes (anamorphe ascochyta pinodes) et phoma medicaginis var. Pinodella. La distinction de ces champignons est rendue difficile en raison de la similitude des symptomes induits, ainsi que de la variabilite et du chevauchement des criteres morphologiques. Pourtant, un diagnostic rapide et fiable est necessaire a l'elaboration de tout programme de lutte, tant pour la selection de cultivars resistants que lors de l'analyse des semences, principale voie de transmission de ces parasites. Trois approches ont ete privilegiees dans cette etude: une approche serologique cherchant a mettre au point un test sensible et specifique dans les semences, et deux autres, biochimique et moleculaire, visant a une meilleure caracterisation de ces trois agents pathogenes. Un test das-elisa sensible a ete mis au point avec un serum polyclonal dirige contre des extraits myceliens solubles de m. Pinodes. Il a permis de detecter la presence de tres faibles quantites de champignons (ng de proteines myceliennes solubles). Des reactions positives ont ete obtenues avec des isolats de m. Pinodes d'origines geographiques diverses, mais egalement avec tous les isolats d'a. Pisi et p. M. Var. Pinodella testes. Parmi les onze autres genres de champignons pathogenes et saprophytes du pois testes, seuls deux (alternaria sp. Et stemphylium sp. ) ont presente des reactions croisees. Une serie d'epuisements du serum avec des extraits antigeniques de p. M. Var. Pinodella et stemphylium, a permis d'ameliorer la specificite du test, au detriment toutefois de sa sensibilite. Le test das-elisa a permis la detection et la quantification de m. Pinodes dans des semences de pois testees individuellement. Il pourrait servir a detecter la presence du complexe des ascochyta dans les semences de pois. L'etude serologique a montre que ces trois agents pathogenes etaient tres proches, possedaient de nombreux antigenes communs et ne pouvaient etre distingues avec certitude. En revanche, l'analyse isoenzymatique a permis de distinguer sans ambiguite a. Pisi de m. Pinodes et p. M. Var. Pinodella. Cette distinction a ete confirmee par l'etude (par pcr/rflp) des adn ribosomiques des trois champignons (plus precisement des espaceurs reliant les genes codants pour les unites ribosomiques). De faibles divergences ont ete notees au niveau de l'espaceur interne transcrit (its) des trois agents pathogenes. Par contre, l'igs (intergenic spacer) a montre des differences importantes entre a. Pisi d'une part, et m. Pinodes et p. M. Var. Pinodella d'autre part. Ces deux dernieres especes presentent de legeres differences mais ne peuvent jusqu'a present etre differenciees avec certitude. Nos resultats indiquent donc une relation plus etroite entre deux organismes appartenant a des genres differents (ascochyta et phoma) qu'a deux especes du meme genre (ascochyta). Les outils proposes permettent a present une meilleure caracterisation de ces trois agents pathogenes du pois, ce qui devrait contribuer a la mise en place de moyens de lutte efficaces