Induction des genes de virulence chez agrobacterium tumefaciens : activite de phenyl-glycosides et purification d'une proteine affine de phenols

Induction of agrobacterium tumefaciens virulence genes: activity of phenyl-glycosides and purification of a phenol-binding protein

• Auteur / Autrice : Florence Wisniewski-Dyé
• Direction : Francis Delmotte
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Orléans

Résumé

L'interaction entre agrobacterium tumefaciens, bacterie du sol, et les cellules vegetales est le seul exemple naturel de transfert d'adn entre un procaryote et un eucaryote. Ce processus complexe aboutit a la formation d'une tumeur, la galle du collet (crown gall), maladie agronomique importante qui affecte la plupart des plantes dicotyledones. D'autre part, cette bacterie est largement utilisee pour transformer genetiquement des vegetaux par l'introduction de genes d'interet agronomique. L'expression des genes de virulence de la bacterie, induite par des composes phenoliques (comme l'acetosyringone ou l'alcool coniferylique), est l'etape cle de ce processus de transformation. Au cours de ce travail, nous nous sommes interesses a la synthese de nouveaux composes phenoliques glycosyles, molecules signal potentielles. L'alcool coniferylique, un precurseur de lignine, a ete couple sur le d-glucose, le d-galactose et le l-fucose pour former des coniferyl-o-glycosides. L'activite inductrice de ces composes a ete etudiee sur deux souches d'a. Tumefaciens portant le gene rapporteur de la -galactosidase d'e. Coli sous la dependance d'un promoteur des genes de virulence. L'activite des derives glucosyle et galactosyle doit etre reliee a la presence d'osidases specifiques chez les bacteries, menant a une hydrolyse prealable du compose glycosyle. Outre une specificite vis-a-vis de la partie osidique, les osidases bacteriennes rencontrees montrent une specificite etroite vis-a-vis de la partie aglycone. L'ose et le phenol ainsi liberes peuvent agir en synergie pour induire les genes de virulence. Des composes de synthese non hydrolysables, des thio-glycosides de l'acetosyringone, montrent egalement une activite inductrice des genes de virulence. Parmi les diverses caracteristiques structurales associees aux proprietes inductrices, ces thio-glycosides presentent une fonction phenol libre. La derniere partie de notre travail s'est focalisee sur la caracterisation et la purification des recepteurs potentiels pour des composes phenoliques. L'acide syringique, par la presence d'une fonction acide carboxylique dans sa structure, a ete greffe sur une matrice d'affinite par l'etablissement d'une liaison amide sur un bras intermediaire. Nous avons montre au prealable que l'introduction d'une fonction amide dans ce compose n'abolissait pas les proprietes inductrices et donc l'interaction avec un recepteur potentiel. Le support chromatographique a permis d'isoler par elution specifique, une proteine de mr 39 kda et de pi 4,3. Cette proteine pbp39 pourrait etre localisee dans l'espace periplasmique mais son implication directe dans la perception des phenols reste a demontrer