Recherche Avancée

Thèse soutenue

Contribution à l'étude de la régulation de la glutamate déshydrogénase à NADP chez le basidiomycète ectomycorhizien Laccaria bicolor S238N

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Auteur / Autrice : Sophie Lorillou
Direction : Francis Martin
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie végétale et forestière
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Nancy 1
Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université Henri Poincaré Nancy 1. Faculté des sciences et techniques

Résumé

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Le transfert du mycélium végétatif de Laccaria bicolor S238N d'un milieu contenant NH4+ (25 mm) sur un milieu contenant NO3- (25 mM) ou sur un milieu prive d'azote provoque une stimulation de l'activité spécifique de la GDH à NADP. La quantification du polypeptide GDH à l'aide d'immunsérum anti-GDH à NADP par la technique des empreintes immun électrophorétiques a démontré que les variations observées dans l'activité spécifique de l'enzyme correspondaient à des différences de concentration du biocatalyseur. L'immunprécipitation d'extraits protéiques provenant de mycélium marqué in vivo en présence de 35Sméthionine met en évidence une synthèse de novo de la GDH à NADP en présence de NO3- ou en absence d'azote. Afin d'étudier les mécanismes moléculaires impliqués dans la biosynthèse de la GDH à NADP, un ADNc pleine longueur correspondant à la GDH à NADP a été isolé chez Laccaria bicolor. L’analyse de la séquence peptidique déduite de la séquence nucléotidique révèle la présence d'acides aminés conservés, impliqués dans la structure et la fonction de l'enzyme. La comparaison avec les séquences en acides aminés de GDH à NADP isolées à partir de d'autres champignons ascomycètes montre une conservation importante de l'enzyme chez les champignons supérieurs. L’ADNc a servi de sonde moléculaire pour étudier l'expression du gène GDH à NADP dans le mycélium de Laccaria bicolor cultivé sur différentes sources d'azote. Lorsque le mycélium est transféré d'un milieu contenant NH4+ (25 mM), sur un milieu contenant NO3- (25 mm) ou sur un milieu privé d'azote, l'accumulation des ARNm de la GDH à NADP est stimulée de 4 fois. La source azotée régulé la GDH à NADP au niveau post-transcriptionnel et/ou transcriptionel