Recherche Avancée

Thèse soutenue

Transformation génétique de protoplastes de variétés méditerranéennes de riz (Oryza sativa L. )

FR  |  
EN
Auteur / Autrice : Hâna Chair
Direction : J. SHWENDIMAN
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie des populations et écologie
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Montpellier 2

Résumé

FR

Dans le but de transformer les varietes mediterraneennes de riz, deux techniques ont ete testees. La technique d'electroporation n'a pas permis d'avoir des expressions transitoires reproductibles. Par contre, une technique de transfert direct de genes utilisant le polyethylene-glycol (peg) a ete adaptee aux protoplastes haploides des varietes ariete et miara. Elle a permis l'obtention de plantes transformees a des frequences de 0. 1 a 3. 2 10#-#6. Afin d'augmenter la frequence d'integration et d'expression des genes transferes, differents facteurs ont ete etudies. La comparaison des systemes de selection bases sur une resistance a la geneticine, a l'hygromycine et au glufosinate d'ammonium conferee par le transfert des genes de selection nptii, hph et bar a montre que les frequences de transformation les plus elevees sont obtenues quand le gene bar est utilise. L'activite de differents promoteurs, utilises actuellement pour la transformation des cereales, a ete comparee dans les protoplastes par mesure de l'activite transitoire de la b-glucuronidase. Cette etude a montre une plus grande efficacite du promoteur ubiquitine du mais mais egalement une activite elevee du promoteur 6are-4ocs-adh-adh1. La strategie de cotransformation utilisant un rapport 2/1 entre le gene rapporteur et le gene marqueur a permis d'obtenir les efficacites de cotransformation les plus elevees, avec des frequences de coexpression des 2 genes de 60%. Apres analyse par cytometrie en flux des plantes transgeniques, il est apparu que le traitement au peg des protoplastes induit une augmentation de leur niveau de ploidie. Les profils d'integration des genes transferes dans les plantes, analyses par la technique southern blot, se sont reveles aussi complexes que ceux obtenus apres transformation de materiel d'origine somatique ou obtenus par d'autres methodes de transfert