Production de vecteurs rétroviraux par des lignées transcomplémentantes aviaires : augmentation du titre en vecteurs et analyse des formes virales parasites produites

Production of retroviral vectors on avian packaging cell lines: improvement of viral titer and molecular analysis of contaminant defective viruses

• Auteur / Autrice : Anne Girod
• Direction : Gérard Verdier
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences. Différenciation, génétique et immunologie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Gérard Verdier

Mots clés

Mots clés contrôlés

Complément (immunologie)

Transcription génétique

Oncogènes viraux

Rétroviridés

Transfert génétique

Résumé

Le laboratoire a developpe, a partir de retrovirus aviaires de type alsv, des lignees transcomplementantes productrices de particules vecteurs en condition helper-free. Nous avons ici recherche a augmenter le titre en particules produites par ces lignees transcomplementantes et analyse les formes virales recombinantes generees par ces systemes. L'introduction du genome vecteur dans la lignee d'empaquetage par infection plutot que par transfection a permis d'accroitre les titres des stocks de vecteurs retroviraux a des valeurs de 10#6 efu-(expressing forming unit)/ml. En revanche, le systeme ping-pong decrit pour les vecteurs retroviraux murins n'a pas permis d'obtenir l'amplification escomptee des titres en virus vecteurs. En outre, dans de telles cocultures, il apparait un virus competent pour la replication, qui porte les fonctions trans des genomes transcomplementants et les fonctions cis du genome vecteur. Les genomes transcomplementants sont deletes de la sequence d'encapsidation et de sequences necessaires a la transcription inverse et l'integration. Cependant, des arn transcrits a partir de ces genomes peuvent etre encapsides, retrotranscrits et s'integrer dans l'adn de la cellule cible. Ce transfert parasite, de l'ordre de 1 particule pour 10#5 particules vecteurs, peut etre explique par des evenements de recombinaison retrovirale entre le genome transcomplementant et le genome vecteur coencapsides. Ces formes virales parasites defectives pour la replication pourraient conduire, apres plusieurs cycles de replication successifs, a l'emergence de formes virales completes, comme celles observees dans le surnageant des cocultures decrites ci-dessus. Le genome des cellules de poule contient des sequences dites endogenes dont la structure est proche de celle des retrovirus. Lorsque les cellules lmh de leghorn noire sont utilisees pour la construction de lignees transcomplementantes, la presence de l'endogene ev3 conduit a la generation de formes virales parasites defectives pour la replication. Celles-ci representent 1% des particules virales produites. Ces resultats permettent d'obtenir une meilleure connaissance des systemes de production de vecteurs retroviraux