Etude structurale et fonctionnelle de la P-sélectine (CD62P) : une protéine exprimée par les plaquettes et les cellules endothéliales activées

Structural and functional study of p-selectin (cd62p): a protein expressed by activated platelets and endothelial cells

• Auteur / Autrice : Marie-Hélène Ruchaud-Sparagano
• Direction : John McGregor
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences. Biochimie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : John McGregor

Mots clés

Mots clés contrôlés

Leucocytes

Plaquettes sanguines

Cellules endothéliales

Sélectines

Résumé

La p-selectine, egalement connue sous le nom de padgem, gmp-140 ou cd62p, appartenant a la famille des selectines, et exprimee par les plaquettes et les cellules endotheliales activees, intervient de facon precoce dans les interactions des leucocytes avec les plaquettes ou l'endothelium actives lors du processus inflammatoire. Dans le but d'etudier le role in vivo de la p-selectine, en utilisant le rat comme modele animal, nous avons clone par rt-pcr la p-selectine de rat, a partir d'arn extrait de poumon stimule au lps. La comparaison de la p-selectine de rat avec celle de l'homme a revele une tres forte homologie, en particulier dans les regions lectine et egf. De plus, un anticorps, produit dans notre laboratoire (lyp20), inhibant les interactions des plaquettes ou cellules endotheliales avec les leucocytes, reconnait la p-selectine de rat et d'homme, mais pas de souris. Puisque cet anticorps reconnait un site fonctionnel de la p-selectine, nous avons localise son epitope, en utilisant la technique de remplacement homologue par mutagenese dirigee pour construire des molecules de p-selectine hybrides dans lesquelles des domaines humains etaient remplaces par l'equivalent murin. Cet epitope est situe, non pas sur le domaine lectine, mais sur un domaine analogue aux proteines regulatrices du complement (scr). En etudiant la fixation des pmns sur des cellules cos exprimant les differentes constructions, nous avons demontre que les domaines scr de la p-selectine augmentaient la fixation des pmns sur la p-selectine. Les resultats obtenus indiquent pour la premiere fois que: (1) un anticorps monoclonal anti-p-selectine et fonctionnel reconnait une region autre que le domaine lectine. (2) les domaines scr peuvent jouer un role important dans les interactions de la p-selectine avec les leucocytes