Expression hétérologue et test d'activité de la protéine Rev du virus HIV-1

Heterologous expression and activity assay of hiv-1 rev protein

• Auteur / Autrice : Florence Boe͏̈
• Direction : Jean-Michel Masson
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie. Biotechnologie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Toulouse, INSA

Mots clés

Mots clés contrôlés

Expression génique

ADN -- Réplication

Protéines de liaison

VIH (virus)

Résumé

La proteine rev est un transactivateur nucleaire necessaire a la replication virale et a l'expression des proteines de structure du virus hiv-1. En effet, rev conditionne le passage de la phase precoce a la phase tardive de l'infection. Ce role decisif de la proteine rev dans le cycle viral, nous a incite a entreprendre la mise en place d'un systeme in vitro, dans la levure, permettant le criblage d'inhibiteurs potentiels de l'activite de la proteine rev. Le test repose sur l'interaction de la proteine rev avec l'arn cible, le rre (rev response element), dont la sequence codante est presente dans le gene env. Nous avons voulu ainsi mimer l'effet de rev sur l'epissage des arn, en presence d'un arnt suppresseur de levure comportant le rre dans sa partie intronique. En absence de proteine rev, le suppresseur phenylalanine est episse et est capable de supprimer une mutation ambre presente dans la sequence d'une proteine, l'-galactosidase. La suppression de la mutation ambre entraine une traduction correcte de la proteine presentant une activite enzymatique visualisable sur boite par coloration bleue des colonies en presence d'-xgal et facilement dosable. Lorsque la proteine rev est exprimee, elle interagit avec le rre et inhibe l'epissage de l'arnt. Ce dernier demeurant inactif, la traduction des arnm de la proteine -galactosidase conduira a une proteine tronquee sans activite enzymatique