Thèse soutenue

Manipulation génétique de la synthèse d'éthylène chez le melon (Cucumis melo, L. ) par expression d'un ADNc antisens codant pour l'ACC oxydase
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Auteur / Autrice : Ricardo Antonio Ayub
Direction : Jean-Claude Pech
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie moléculaire et cellulaire végétale
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Toulouse, INPT

Résumé

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Les travaux presentes dans cette these ont permis d'obtenir des melons transgeniques (cucumis melo l. Type charentais, var. Vedrantais) exprimant un adnc codant pour l'acc oxydase et presentant une inhibition importante de la maturation tant sur pied qu'apres recolte. Il s'agit la du premier exemple de manipulation genetique d'un fruit autre que la tomate. Ce resultat a ete obtenu par transformation de cotyledons de melon via agrobacterium tumefasciens en utilisant une construction antisens de l'adnc de melon pmel1 (balague et al, 1993) et un gene de selection nptii codant pour la neomycine phosphotransferase. Les plantes regenerees en presence de kanamycine ont ete criblees pour la presence du transgene pmel1 par pcr et pour leur capacite a produire de l'ethylene de blessure a partir de jeunes feuilles. Les clones retenus a l'issu de ce criblage ont ete autofecondes et l'un d'entr'eux, b-17, a ete selectionne en raison d'une inhibition tres importante de la synthese d'ethylene. La descendance de ce clone presente une segregation mendelienne du transgene. L'analyse moleculaire par southern blot a permis de montrer que l'insertion comporte deux copies de l'adnc sur un meme locus. La presence du transgene entraine une reduction considerable de l'expression du gene endogene surtout dans le fruit, tant au niveau des arn que de la proteine. En consequence, la production d'ethylene est inhibee a plus de 95% dans les fruits transgeniques par rapport aux fruits temoins non transformes, ce qui se traduit par une tres forte inhibition du processus de maturation. Des observations preliminaires sur les caracteristiques physiologiques et organoleptiques des fruits transgeniques et sur leur aptitude a la conservation laissent esperer des retombees extremement prometteuses de ce travail, tant sur le plan fondamental qu'applique