Recherche Avancée

Thèse soutenue

Caractérisation des propriétés biologiques de la séquence VL30 rat et développement de nouveaux vecteurs rétroviraux MLV-VL30

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Auteur / Autrice : Christophe Torrent
Direction : Jean-Luc Darlix
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences de la vie
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Lyon, École normale supérieure (sciences)

Résumé

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Les vecteurs rétroviraux constituent un moyen élégant et efficace pour transférer un gène. Cependant, la séquence d'encapsidation psi+ MoMLV qui dirige l'encapsidation de l’ARN recombinant présente des caractéristiques susceptibles de réduire l'efficacité et la sécurité biologique du transfert de gène: taille importante, présence de séquences virales codantes et homologies avec le génome auxiliaire des cellules d'encapsidation aussi, nous avons cherché à remplacer cette séquence par un signal d'encapsidation hétérologue. L’ARN VL30 (virus-like 30s), présent dans les cellules de rat, est encapsidé dans les particules virales MoMLV (moloney murine leukemia virus). Le génome du virus du sarcome murin de souche Harvey (HaMSV) est issu de recombinaisons entre la séquence VL30 rat, le génome du rétrovirus MoMLV et l'oncogène c-Ha-ras. Dans le leader de ce rétrovirus, la séquence d'encapsidation psi+ MoMLV a été remplacée par une séquence VL30. Aussi, nous avons recherché la présence d'une séquence d'encapsidation dans la région VL30 rat du rétrovirus HaMSV. Notre étude a permis d'identifier dans la séquence VL30 rat, un signal d'encapsidation dont les caractéristiques sont remarquables: une efficacité d'encapsidation importante voire supérieure à la séquence psi+ MoMLV, une taille réduite (590 nt), une absence d'homologies avec les séquences du génome auxiliaire et une absence de séquences virales codantes. La séquence VL30 rat contient également un signal de dimérisation. Les analyses génétiques et biochimiques de la dimérisation de l’ARN HaMSV suggèrent que la formation de l’ARN dimère débute par la reconnaissance des deux molécules d’ARN au niveau d'un motif répète inverse présent dans une structure de type tige-boucle. Enfin, nous avons également caractérise dans la séquence VL30 rat un signal d'entrée directe des ribosomes ou ires (internal ribosomal entry site) qui favorise une traduction indépendante de la coiffe de l'oncogène v-Ha-ras. La possibilite pour la séquence VL30 de diriger l'encapsidation de l’ARN recombinant et l'initiation de la traduction d'un gène localise en 3' nous a permis de développer de nouveaux vecteurs rétroviraux bicistroniques