Recherche Avancée

Thèse soutenue

Isolement et caractérisation des protéines apparentées à l'interleukine 2

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Auteur / Autrice : Dominique Jarnet
Direction : Daniel Thomas
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Compiègne
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Sciences pour l'ingénieur (Compiègne)

Résumé

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L'interleukine 2 (IL2) est un polypeptide de 133 acides aminés sécrétés par les lymphocytes T. Cette lymphokine est capable de stimuler l'activité de toutes les cellules qui participent à la réponse immunitaire. Au vu de ces propriétés, l'IL2 est apparue comme une substance de grand intérêt dans la perspective d'une immunostimulation à visée thérapeutique. La disponibilité de quantités pratiquement illimitées de molécules recombinantes, grâce au génie génétique, ainsi que l'absence de barrière d'espèce ont permis de développer rapidement des travaux précliniques pour évaluer ce potentiel. Suite à ces travaux, l'IL2 a été introduite en clinique, chez des patients atteints de cancers résistants aux traitements conventionnels. L'IL2 humaine recombinante développée par ROUSSEL UCLAF est non glycosylée et possède la particularité d'être sous forme réduite active. Cette forme est obtenue grâce à un procédé original breveté par ROUSSEL UCLAF. Dans le cadre du schéma global de validation de l'IL2, dont l'objectif est de garantir son efficacité, sa qualité et sa sécurité, s'inscrit la purification et la caractérisation des protéines apparentées à l'IL2, présentes dans le produit fini. Les méthodes de mise en évidence de ces protéines sont basées sur leurs différentes propriétés physico-chimiques, à savoir la masse moléculaire, le point isoélectrique et l'hydrophobicité. Leur isolement nécessite la mise au point de techniques très résolutives et extrapolables au niveau préparatif. Afin de répondre à ces exigences, nous utilisons la chromatographie liquide haute performance de phase inverse et la chromatofocalisation. Par ces méthodes, nous purifions plusieurs protéines apparentées à l'IL2. Leur caractérisation a permis de les diviser en deux groupes : les analogues dont l'activité biologique est similaire àcelle de l'IL2 et les impuretés dont l'activité biologique est fortement diminuée. Selon le type de modification, nous avons émis des hypothèses quant aux stades du procédé ou ces analogues et impuretés sont susceptibles de se former. Si l'amélioration de la qualité du produit fini s'avérait nécessaire, nous pourrions donc imaginer les moyens pour limiter leur formation ou tout au moins améliorer leur élimination lors des étapes de purification.